Прокладки глушителя MERCEDES T1,T2 405, 406, 407, 408, 409, 410, 508, 507, 601, 602, 609, 611, 613, 709, 714, 809, 811, 814, 911 (Мерседес Т1,Т2)
В интернет магазине Dimavto.com любой покупатель-автолюбитель может выбрать и купить Прокладки глушителя на mercedes T1,T2 405, 406, 407, 408, 409, 410, 508, 507, 601, 602, 609, 611, 613, 709, 714, 809, 811, 814, 911 с объемом двигателя на литров таких производителей REINZ. Если у вас имеются вопросы, или они появились в процессе выбора, и это мешает вам определиться с окончательным решением, вам придет на помощь наша служба поддержки. Это поможет вам правильно выбрать именно те запчасти, которые соответствуют модели вашего автомобиля.
Успех поиска необходимой детали в нашем магазине обусловлен наличием широчайшего ассортимента запчастей, поставляемых нам от производителей с разных частей мира. Политика нашего магазина основывается на тщательной проверке качества продаваемых у нас запчастей и их соответствия высшим стандартам.
Все продаваемые у нас товары имеют оригинальное происхождение. Каждый покупатель покупая
Параметры поиска запчастей:
- По товарному коду;
- По производителю и модели автомобиля.
- С помощью подсказок специалиста по запчастям.
Выбранный товар можно сразу забрать в корзину на сайте в режиме онлайн, либо позвонить по телефону 096 258 29 80 или 066 663 64 31 или 093 630 27 55 и сделать заказ лично.
Наш магазин широко представляет автозапчасти не только по наименованиям известных производителей, но и по группам агрегатов и узлов. По нашему каталогу можно легко отыскать и купить дефицитные элементы ходовой, редко встречающиеся запчасти двигателя, надежные детали для тормозной и рулевой систем, коробки передач, а также других узлов автомобиля.
С помощью каталога наши покупатели могут не просто отыскать необходимый им товар, но и прочитать его характеристики. У нас можно увидеть детальное изображение товара по фотографиям и видеороликам. Наша ценовая политика всегда прозрачна и доступна.
Для того чтобы вам было проще разобраться в особенностях запчастей Прокладки глушителя и их совместимости с Мерседес Т1,Т2 по году выпуска, модификации и разновидностям автомобиля, лучше перестраховаться и уточнить нюансы с нашими менеджерами.
Прежде чем приобрести для замены Прокладки глушителя , лучше посоветоваться со специалистами. Предупредительная осторожность поможет вам без проблем заменить старую запчасть на новую с первого раза. Для этого наши менеджеры гарантированно помогут вам с выбором и быстро оформят покупку с доставкой.
масло для Mercedes-Benz (EU) L L 508 D (1981-1986). Какое масло подходит лучше всего? Профессиональные рекомендации по смазочным материалам
масло для Mercedes-Benz (EU) L L 508 D (1981-1986).
Какое масло подходит лучше всего? Профессиональные рекомендации по смазочным материалам — Kroon-Oil
Какое масло следует использовать для вашего Mercedes-Benz (EU) L L 508 D (1981-1986)? Исчерпывающие рекомендации для всех компонентов автомобиля, включая, двигатель, коробку передач (ведущий мост в блоке с коробкой передач), тормозную систему, а также систему охлаждения и рулевое управления с усилением.Двигатель Mercedes-Benz OM314
Дифференциал задний
Oбъём: 3,25 л
Коробка передач автоматическая 4/1
Oбъём: 10 л
Коробка передач ручная 5/1
Oбъём: 3,4 л
Отбор мощности
Oбъём: 0,6 л
Гидравлические тормоза/система сцепления
Oбъём: 0,75 л
Усилитель рулевого управления
Oбъём: 1,6 л
Точки смазки/масленки колесные подшипники
Точки смазки/масленки листовые рессоры
Точки смазки/масленки подшипник механизма выключе
Точки смазки/масленки прочие
Точки смазки/масленки скользящие соединения
Система охлаждения
Oбъём: 14 л
Воздухоотчиститель масляной ванны
Oбъём: 0,5 л
Картер рулевого механизма
Oбъём: 1 л
Как новый Peugeot 508 пошел в премиум и что из этого вышло — Авторевю
Для нас новый Peugeot 508 — это новость бегущей строкой внизу экрана.
Без пометки «срочно». Второе поколение автомобиля, который в России прославился разве только тем, что его никто не покупал. Теперь все должно быть по-другому, потому что от прежнего седана новый 508 унаследовал лишь индекс. Теперь это лифтбек, который стал компактнее, ярче и, видимо, дороже предшественника. На российском рынке он появится только в первой половине 2019 года, но я уже поездил на европейских версиях по окрестностям Монако и могу кое-что рассказать.
Презентация Peugeot в Монако — это тоже часть программы преображения марки. Чтобы претендовать на место рядом с Мерседесом, BMW и Audi, французы щедро вложились в дизайн, сделали силуэт как у купе, поставили безрамочные двери, добавили подъемную дверь багажника. По-другому в европейском D-классе сейчас не прожить: нужно быть либо Пассатом, либо карабкаться в премиум.
Честно говоря, такое уже было и прежде. Peugeot 508 образца 2011 года тоже преподносили как выход в другой класс. «Пятьсот восьмой» тогда сменил сразу две модели — 407 и 607, — получив новый индекс, новый облик и совершенно иначе осмысленный интерьер, чтобы на равных стоять рядом с «немцами».
В 2018 году новый дизайн и салон тоже главные козыри «пятьсот восьмого», но шасси стало проще. В Peugeot воспользовались модульной архитектурой EMP2 от хэтчбека 308 и кроссовера 3008, которая предполагает передние стойки McPherson, заднюю многорычажку, дизели 1.5 и 2.0, а также бензиновый турбомотор 1.6 и восьмиступенчатый «автомат» Aisin. Я поездил на версиях PureTech 225 (бензин, 225 л.с.) и BlueHDi 180 (дизель, 180 л.с.), которые, возможно, не будут самыми востребованными в России, но дают представление о том, куда движется Peugeot.
И еще один важный нюанс для понимания нового Peugeot 508. В Европе почти половина продаж машин этого класса приходится на сегмент B2B, корпоративные парки, такси и прокатные конторы, то есть на модели владения, очень чувствительные к стоимости эксплуатации и потере цены при перепродаже. Раньше с этим не все было гладко, а теперь обещают, что 508 останется как новенький даже после 90 тысяч километров.
Мой тест-драйв был немного короче, но я все равно успел зафиксировать главные впечатления — они в видеорепортаже. А полноценный текст выйдет позже, когда вся редакция Авторевю вернется из отпуска.
Регулировка рулевого механизма мерседес 508. Автоновости, отзывы, фотографии
Содержание статьи:Фото Mercedes-Benz W | Регулировка люфта рулевого механизма | Мерседес Бенц Видео Похожие статьи
Где находится болт регулировки рулевого редуктора на MB 93 года? Может кто сталкивался. Где находится болт регулировки рулевого редуктора на MB 93 года? 13 Май #2.
Mercedes-Benz T1 owner story — DIY repair. Напрягало при езде рыскание машины из стороны в сторону. Оказалось убиты рулевые наконечники продольной тяги. Когда снял тягу и подергал за сошку рулевого редуктора, свободный ход в месте соединения рулевого наконечника с сошкой был около одного сантиметра.
Свободный ход убрал регулировочным винтом. Свободный ход убрал регулировочным винтом. Очень удобно регулировать люфт рулевой сошки при снятой тяге. Шевеля сошку рукой, люфт практически убираешь в ноль, и при регулировке не надо другому сидеть в кабине и крутить руль. Понравилась доступность ремонта, но колесо снять надо.
В этом видео мы покажем как отрегулировать рулевой редуктор. Вы узнаете: как выглядит рулевой редуктор; — зачем регулировать рулевой редуктор; — какие.
Датчик углового ускорения в RCDI? Сам написал, сам и отвечаю. Как отрегулировать рулевой редуктор? Продам w кабриолет 3,2 км. Повышенный зазор возникает в первую очередь в зацеплении червяка и ролика, а затем увеличивается осевое перемещение червяка вместе с валом рулевого механизма.
Люфт рулевой — logbook Mercedes-Benz T1 D трудяга «МУРЗИК» on DRIVE2
В процессе эксплуатации изнашиваются рабочие поверхности червяка, ролика, подшипников, а также вала сошки, бронзовых втулок, головки регулировочного винта, шайбы и Т-образный паз вала сошки.
Вследствие этого в рулевом механизме появляются зазоры, которые могут быть причинами стуков во время движения, вибрации передних колес, потери устойчивости автомобиля и других вредных явлений.
Показателем появления зазора служит увеличенный свободный ход рулевого колеса. Повышенный зазор возникает в первую очередь в зацеплении червяка и ролика, а затем увеличивается осевое перемещение червяка вместе с валом рулевого механизма. Указанные зазоры по мере их возникновения должны устраняться регулировкой рулевого механизма.
Кроме износа перечисленных деталей, причинами увеличенного свободного хода рулевого колеса могут быть ослабление крепления сошки на валу рулевого механизма или крепления картера рулевого механизма к раме, а также увеличенные зазоры в шарнирах рулевых тяг и передней подвески. Поэтому перед регулировкой рулевого механизма следует проверить состояние рулевых тяг передней подвески, устранить зазоры в шарнирах и подтянуть ослабевшие крепления.
Больший свободный ход, остающийся после подтяжки ослабевших соединений и устранения зазоров в шарнирах, свидетельствует о необходимости регулировки рулевого механизма.
Осевое перемещение червяка и боковой зазор в зацеплении можно регулировать без снятия рулевого механизма с автомобиля. Рулевой механизм после разборки и регулировки устанавливается в обратном порядке и в той же комплектности. Следует учесть, что при соединении сошки с рулевым механизмом ее нужно устанавливать по меткам, имеющимся на торце большой головки сошки и торце резьбового конца вала сошки.
Сошка должна быть надета так, чтобы риска на торце ее большой головки совпадала с меткой керном на торце резьбового конца вала сошки. Несовпадение рисок приведет при крайнем положении руля к упору ролика в картер рулевого механизма, что очень опасно, так как повлечет за собой недостаточный разворот передних колес в одну из сторон и, возможно, поломку рулевого механизма.
ФАКТ! Основатель компании Apple, Стив Джобс, ездил исключительно на автомобилях Мерседес. При этом, без номеров. Это была визитная карточка Джобса. По законам Калифорнии, без номеров можно ездить первые 6 месяцев после покупки.
Таким образом, каждые пол года Стив менял авто, сдавал в салон «старый» мерс и покупал новый.Таким образом, при полностью повернутых передних колесах в рулевом механизме остается запас хода. Рулевой механизм следует устанавливать на автомобиль так, чтобы при полностью затянутых болтах 15 крепления картера к лонжерону и рулевой колонке с надетой на нее прокладкой 50, прижатой к опоре 45 колонки, отверстия в кронштейне 49 крепления рулевой колонки совпадали с отверстиями фланцевых гаек, приваренных к подвижной планке 47, помещенной внутри опоры.
Возможны случаи, когда вследствие деформации кузова при аварии или длительной езды но неблагоустроенным дорогам при передвижении планки не удается добиться совпадения отверстий и требуется приложение усилия для установки на место рулевой колонки. В этом случае необходимо подпилить внутренние торцы одной или двух приваренных к лонжерону втулок 13 и 14, к которым крепится картер рулевого механизма, и проверить правильность положения колонки.
При деформациях кузова и подмоторной рамы автомобиля возможны также случаи, когда при предварительно поднятой вверх рулевой колонке и затянутых болтах крепления картера рулевого механизма колонка не будет касаться опоры Для устранения этого необходимо распилить в нужную сторону два отверстия в картере рулевого механизма или положить прокладки требуемой толщины между опорой и рулевой колонкой и поставить удлиненные болты.
Неправильная установка рулевого механизма на автомобиль, при которой вал и рулевая колонка могут изогнуться, вызовет повышенные усилия на рулевом колесе и в механизме управления коробкой перемены передач, а также расшатывание крепления колонки к картеру.
Люфт рулевого на 124том?
Вызовы вируса короны MERS и вируса короны SARS для глобального здравоохранения
% PDF-1.7
%
1 0 объект
>
эндобдж
10 0 obj
>
эндобдж
2 0 obj
>
эндобдж
3 0 obj
>
эндобдж
4 0 obj
>
транслировать
application / pdfdoi: 10.
1016 / j.sjbs.2016.02.019
comↂ005B1ↂ005D>Роль спайкового гликопротеина коронавируса ближневосточного респираторного синдрома человека (БВРС-КоВ) в проникновении вируса и образовании синцитий
Цитирование: Qian Z, Dominguez SR, Holmes KV (2013) Роль спайкового гликопротеина среднего человека Коронавирус восточного респираторного синдрома (БВРС-КоВ) в проникновении вируса и образовании синцитий.
PLoS ONE 8 (10):
e76469.
https://doi.org/10.1371/journal.pone.0076469
Редактор: Сяофэн Рен, Северо-восточный сельскохозяйственный университет, Китай
Поступила: 24 июня 2013 г .; Одобрена: 29 августа 2013 г .; Опубликован: 3 октября 2013 г.
Авторские права: © 2013 Qian et al. Это статья в открытом доступе, распространяемая в соответствии с условиями лицензии Creative Commons Attribution License, которая разрешает неограниченное использование, распространение и воспроизведение на любом носителе при условии указания автора и источника.
Финансирование: Эта работа была частично поддержана программой грантов штата Колорадо по оценке открытия биологических наук (HB-07-1001) и грантом NIH K08 AI-073525 для SRD. Финансирующие организации не играли никакой роли в дизайне исследования, сборе и анализе данных, принятии решения о публикации или подготовке рукописи.
Конкурирующие интересы: Авторы заявили об отсутствии конкурирующих интересов.
Введение
Коронавирусы вызывают респираторные, кишечные, почечные и / или неврологические заболевания у людей, многих других млекопитающих и птиц.В 2002–2003 годах ранее неизвестный коронавирус появился из резервуара диких животных, что вызвало пандемию атипичной пневмонии, в результате которой было зарегистрировано около 8000 случаев заболевания людей и более 770 смертей [1,2]. Ранее межвидовая передача от коронавирусов летучих мышей и крупного рогатого скота позволила респираторным коронавирусам человека OC43, NL63 и 229E утвердиться в человеческой популяции во всем мире [3–8]. На Аравийском полуострове в 2012 году в клетках Vero E6 из мокроты от смертельного случая тяжелого респираторного заболевания с почечной недостаточностью был выделен еще один новый человеческий CoV, который теперь называется коронавирусом ближневосточного респираторного синдрома (MERS-CoV).
С тех пор РНК БВРС-КоВ была обнаружена с помощью ОТ-ПЦР у более чем 70 пациентов с респираторным заболеванием тяжелой и средней степени тяжести, 39 из которых умерли [9,10]. Анализ геномной последовательности показал, что БВРС-КоВ представляет собой новый бета-коронавирус в геногруппе c, тесно связанный с двумя прототипами бета-коронавирусов группы c азиатских летучих мышей, BtCoV-HKU4 из Tylonycteris pachypus летучей мыши и BtCoV-HKU5 из Pipramus66 batt. 11], а также частичным последовательностям бета-коронавируса группы c от летучей мыши Pipistrellus pipistrellus из Нидерландов [12].Недавно бета-коронавирусы группы c были также обнаружены у летучих мышей Nyctinomops laticaudatus в Мексике [13] и Nycyteris cf. gambiensis летучих мышей в Гане [14]. БВРС-КоВ, как и SARS-CoV, вероятно, является зоонозным бета-коронавирусом, который прямо или косвенно распространился на человека от одного из видов летучих мышей, являющихся носителями бета-коронавирусов группы c, или из других неизвестных резервуаров животных [13,15,16] .
Спайковый гликопротеин (S) коронавирусов ~ 200 кДа является важным детерминантом вирулентности вируса, тропизма тканей и диапазона хозяев.Тримеры S образуют характерные большие шипы на оболочке коронавируса, которые связываются с рецепторами, опосредуют слияние мембран, проникновение вируса и образование синцитий, а также индуцируют вирус-нейтрализующие антитела. Белки коронавируса S представляют собой слитые белки вируса класса I, такие как оболочка ВИЧ (env), гемагглютинин гриппа (HA) и слитые гликопротеины парамиксовируса (F) [17], которые обычно требуют протеазного расщепления между доменами S1 и S2 (рис. 1A), чтобы разрешить конформационные изменения в S2, активируемые связыванием рецептора и / или низким pH, которые опосредуют слияние мембран, приводящее к проникновению вируса и образованию синцитий [3,17,18].В разных типах клеток и тканях белки коронавируса S могут расщепляться множеством протеаз-хозяев, включая фурин, трипсин, трипсиноподобную протеазу дыхательных путей человека (HAT), трансмембранную протеазу сериновую протеазу-2 (TMPRSS-2), TMPRSS-4, или катепсины [18–22].
Функциональный анализ гликопротеина S БВРС-КоВ необходим для выявления типов чувствительных клеток и видов хозяев, которые влияют на тропизм вирусной ткани и круг хозяев, а также для определения того, как различные протеазы хозяина способствуют проникновению вируса БВРС-КоВ и образованию синцитиев.
Рис. 1. Включение белка SΔ16 БВРС-КоВ в псевдовирионы (А) Диаграмма полноразмерного белка S БВРС-КоВ и белка SΔ16 БВРС-КоВ с С-концевыми 16 аминокислотами, замещенными линкером и тегом FLAG.
S1, домен прикрепления вируса; S2 — домен слияния мембран; TM, трансмембранный домен. (B) Обнаружение нерасщепленного белка SΔ16 БВРС-КоВ в клетках и псевдовирионах. Дорожки 1 и 5 — контрольные псевдовирионы без спайка; полосы 2 и 6 — псевдовирионы MERS; дорожки 3 и 7 — лизат клеток 293Т, продуцирующих псевдовирионы MERS; дорожки 4 и 8, лизат клеток 293T, продуцирующих контрольные псевдовирионы без спайка.Дорожки с 1 по 4 промотировали анти-FLAG; и дорожки 5-8, с поликлональными козьими антителами АО4 к S-белку MHV-A59.
* указывает на возможный тример S-белка БВРС-КоВ в псевдовирионах. В псевдовирионах, полученных в клетках 293T, S-белок ~ 200 кДа не расщеплен. (C) Идентификация домена белка S БВРС-КоВ, который распознается поликлональными антителами к белку-шипу MHV. Усеченные белки S MERS-CoV с c-концевыми тегами FLAG собирали из среды над трансфецированными клетками, анализировали с помощью SDS-PAGE, а затем блотировали антителами против FLAG или AO4.Лизат клеток 293Т, экспрессирующих MERS SΔ16 с оптимизированными кодонами полной длины, показан на дорожке 1 в качестве положительного контроля для распознавания MERS S с помощью AO4.
https://doi.org/10.1371/journal.pone.0076469.g001
Идентификация рецептора или рецепторов — важный первый шаг в понимании диапазона хозяев и тканевого тропизма коронавирусов. В настоящее время известны четыре рецепторных белка для белков-шипов различных коронавирусов: молекула клеточной адгезии карциноэмбрионального антигена мыши 1a (mCEACAM1a) для вируса гепатита мышей (MHV) [23], бета-коронавирус в группе a; аминопептидаза N (APN) для человеческого коронавируса 229E (HCoV-229E) и некоторых других альфа-коронавирусов [24,25]; и ангиотензинпревращающий фермент 2 (ACE2) как для SARS-CoV, бета-коронавируса группы b, так и для HCoV-NL63, альфа-коронавируса [26,27].
Raj и соавторы [28] недавно продемонстрировали, что БВРС-КоВ использует дипептидилпептидазу 4 (DPP4) в качестве рецептора. Напротив, S-белки нескольких бета-коронавирусов группы a, включая бычий коронавирус и hCoV-OC43, используют фрагменты сиаловой кислоты в качестве рецепторов [29,58]. Мы использовали псевдотипы лентивирусов с гликопротеином спайков БВРС-КоВ для идентификации клеток, восприимчивых к инфекции БВРС-КоВ, и для изучения роли белка S MERS в проникновении вируса и формировании синцитий.
Результаты
Экспрессия гликопротеина спайка (S) БВРС-КоВ и включение в псевдовирионы лентивируса
Экспрессия белков коронавируса S на клеточных мембранах 293T для включения в псевдовирионы лентивируса может быть усилена за счет использования кодон-оптимизированной спайковой кДНК и удаления мотива удерживания ER / Golgi и мотива рециклинга эндосом из цитоплазматического хвоста S [30–32].Оптимизированная по кодонам кДНК, кодирующая S MERS-CoV (полученная из GenBank: AFS88936) [15], с 16 C-концевыми аминокислотами, замененными линкером, GGGGS и тегом FLAG (здесь называемым MERS-CoV SΔ16) (рис.
1А) экспрессировалась на клеточных мембранах 293Т и включалась в оболочки псевдовирионов лентивируса. Иммуноблоттинг гелей SDS-PAGE клеточного лизата (фиг. 1B, дорожка 3) с анти-FLAG выявил две полосы SΔ16 БВРС-КоВ примерно при 200 кДа, которые, вероятно, отражают изменения в гликозилировании SΔ16 во время транспортировки через Гольджи.Только верхняя полоса S была включена в псевдовирионы MERS (рис. 1B, дорожка 2). Продукты протеазного расщепления белка S размером ~ 200 кДа не были обнаружены в трансфицированных клетках 293Т или псевдовирионах (рис. 1В). Напротив, псевдовирионы лентивируса MERS, использованные для идентификации клеток, восприимчивых к проникновению MERS-CoV в лаборатории Poehlmann [33], содержали высокую долю расщепленного белка S MERS-CoV около 100 кДа. Это важное различие в псевдовирионах MERS, вероятно, связано с различиями между нашими клетками 293T и клетками, используемыми в лаборатории Пёльмана.Неожиданно, когда эти псевдовирионы MERS и клеточные лизаты были подвергнуты блоттингу поликлональным козьим антителом AO4 к спайкам, очищенным от разрушенных детергентом вирионов MHV-A59, бета-коронавируса в группе a, были обнаружены полосы белка MERS S (рис.
1B). Иммуноблоттинг растворимых усеченных белков MERS S с C-концевыми тегами FLAG показал, что антитело AO4 не распознало домен S1 MERS S (рис. 1C), поэтому перекрестная реактивность между этими белками из групп бета-коронавируса a и c должна находиться в пределах домен S2.
Псевдовирионы MERS идентифицируют клеточные линии, которые обладают активностью рецептора MERS-CoV
Vero E6 и LLCMK2 клеточные линии почек обезьян восприимчивы к инфекции вирусом MERS-CoV и SARS-CoV [10,34], а также чувствительны к псевдовирионам SARS и псевдовирионам MERS с нерасщепленным S-белком (рис. 2A). Вхождение клеток определяли по экспрессии репортерного гена люциферазы в клетках, трансдуцированных псевдовирусом. По сравнению с контрольными псевдовирионами без спайкового белка, псевдовирионы MERS продемонстрировали от 100 до 1000 раз увеличение активности люциферазы в клетках Vero E6 и LLCMK2 (рис. 2A и B), а псевдовирионы SARS показали повышение активности люциферазы в клетках Vero E6 на 1000 раз.
Поскольку нерасщепленный белок S MERS-CoV опосредовал проникновение вируса в клетки Vero E6 и LLCMK2, трансдукция псевдовирионами MERS была использована для идентификации дополнительных клеточных линий, которые экспрессируют функциональные рецепторы для MERS-CoV [10,34]. Псевдовирионы MERS выявляли сильную рецепторную активность MERS-CoV на линии Calu3 эпителиальных клеток дыхательных путей человека (рис. 2A и B) и более слабую рецепторную активность на линии A549 альвеолярных базальных эпителиальных клеток человека (рис. 2A), как также показывает MERS-CoV. инфекция [35]. Интересно, что линия эмбриональных клеток EFF из Eptesicus fuscus летучих мышей была восприимчива к псевдовирионам MERS, увеличивая активность люциферазы почти в 100 раз по сравнению с контролем без спайков, но линия клеток легких TB1Lu из Tadarida brasiliensis летучих мышей, мышиных фибробластов и Клетки HeLa не были восприимчивы к псевдовирионам MERS (рис. 2С).Экспрессия человеческого ACE2 в клетках 293T не привела к значительному увеличению восприимчивости к псевдовирионам MERS (рис.
3A), хотя, как и ожидалось, hACE2 значительно увеличил восприимчивость клеток 293T к псевдовирионам SARS (рис. 3A). Фигуры 3B и C показывают, что ни CEACAM1 человека, ни четыре родственных белка CEACAM человека, ни APN человека не функционируют в качестве рецептора для белка шипа MERS-CoV. Эти эксперименты подтверждают наблюдение, что БВРС-КоВ не использует рецепторные белки, известные для других коронавирусов [33], или родственные человеческие мембранные белки.Вместо этого DPP4 является основным рецепторным белком БВРС-КоВ [28]. Псевдовирионы MERS вызывали небольшое, но устойчивое 5-10-кратное увеличение активности люциферазы в клетках почек человеческого эмбриона 293T по сравнению с контрольным вирусом без спайков (рис. 2C), что позволяет предположить, что наши клетки 293T экспрессировали либо низкий уровень DPP4, либо альтернативный но менее эффективный рецептор, такой как CD209L или LSECtin для SARS-CoV [36,37].
Рис. 2. Попадание в клетки человека, обезьяны и летучей мыши псевдовирионов с гликопротеинами SARS-CoV, VSV или MERS-CoV.
(A) Попадание псевдовирионов SARS (синий), MERS-CoV (красный) или отсутствия спайк-контроля (белый) в 293 / hACE2 (клетки 293, стабильно экспрессирующие hACE2, рецептор SARS-CoV), Vero E6, LLCMK2, Calu3 и клеточные линии A549. Поступление псевдовируса количественно оценивали по активности люциферазы через 40 часов после инокуляции (pi). (B) Проникновение псевдовирионов БВРС-КоВ (красный) или отсутствие контроля (белый) в клетки HeLa, экспрессирующие 6 различных белков CEACAM человека, клетки Calu3, LLCMK2 и Vero E6. (C) Внесение псевдовирионов VSV (черный), MERS-CoV (красный) или без контроля (белый) в различные клеточные линии: 293T, NIh4T3, NIh4T3 / вектор (трансфицированный пустым вектором), NIh4T3 / hAPN (стабильно экспрессирующий человеческий APN), EFF летучей мыши (клетки эмбриона из Eptesicus fuscus ) и TB1Lu летучей мыши (клетки легких из Tadarida brasiliensis ).
https://doi.org/10.1371/journal.pone.0076469.g002
Рис. 3.
Ингибирование проникновения псевдовирионов MERS лизосомотропными агентами или ингибиторами катепсина.
(A) Вход в клетки Vero E6 псевдовирионов с белком SARS S, нерасщепленным белком S MERS-CoV или без контроля спайков в присутствии 20 мМ NH 4 Cl (столбики с восходящими полосами), 200 нМ бафиломицина A (столбцы с горизонтальные полосы) или только среда (без контроля ингибитора, белые полосы). (B) Влияние ингибиторов катепсина на проникновение псевдовирионов с нерасщепленным белком S MERS-CoV, белком SARS S или VSV-g.Ингибитор катепсина широкого спектра действия, E64D или L-специфический ингибитор катепсина, ингибитор катепсина L III (черные столбцы) снижали проникновение псевдовирионов MERS и SARS, но не подавляли проникновение псевдовирионов VSV по сравнению с контролем без ингибиторов (белые столбцы). Поступление вируса оценивали по активности люциферазы через 40 часов после введения.
https://doi.org/10.1371/journal.pone.0076469.g003
Влияние ингибиторов закисления эндосом на проникновение псевдовирионов MERS
Чтобы определить, требует ли проникновение псевдовирионов MERS с нерасщепленным S-белком эндоцитоз и подкисление в эндосомах, были изучены эффекты хлорида аммония и бафиломицина А, лизосомотропных агентов, которые ингибируют подкисление эндосом.
В клетках Vero E6 20 мМ NH 4 Cl ингибирует проникновение псевдовирионов SARS примерно на 99,9% по сравнению с проникновением псевдовирионов SARS без ингибитора, а NH 4 Cl также ингибирует проникновение псевдовирионов MERS примерно на 99,6% (рис. 3A). Бафиломицин А специфически ингибирует H + -АТФазу вакуолярного типа, которая необходима для подкисления лизосом. На рис. 3А показано, что бафиломицин А ингибирует проникновение псевдовирионов SARS в клетки Vero E6 на 99,8%, как сообщалось ранее [21,38], а также ингибирует проникновение псевдовирионов MERS более чем на 99.9% по сравнению с псевдовирионами MERS без ингибитора. В клетках LLCMK2, хотя бафиломицин А подавлял 99,7% опосредованного БВРС-КоВ S входа, NH 4 Cl снижал S-опосредованное проникновение БВРС-КоВ только в 6 раз (данные не показаны), что позволяет предположить, что ингибирование закисления эндосом с помощью NH 4 Cl может зависеть от типа клеток. Эти эксперименты показывают, что псевдовирионы MERS с нерасщепленным S-белком могут проникать в клетки почек обезьян только за счет эндоцитоза.
Вступление псевдовирионов MERS в эндосомы требует расщепления S катепсином L
Катепсины представляют собой разнообразную группу активируемых кислотой цистеиновых протеаз, расположенных в эндосомах и лизосомах.Активность катепсина важна для заражения несколькими вирусами, которые проникают эндосомным путем, включая реовирус [39], SARS-CoV [22] и эболавирус [40]. E64D, ингибитор активности цистеиновых протеаз катепсинов B, H и L и кальпаина, снижает трансдукцию клеток Vero E6 псевдовирионами SARS на 80%, как сообщалось ранее (рис. 3B) [41]. Поскольку вход в клетки, опосредованный гликопротеином VSV-g, не требует активации протеазы [17], обработка E64D клеток Vero E6 (рис. 3B) и LLCMK2 (данные не показаны) не ингибировала проникновение псевдовирионов VSV.Однако E64D уменьшал проникновение в клетки Vero E6 псевдовирионов MERS с нерасщепленным S на 96,7% (рис. 3B) и клеток LLCMK2 на 99,2% (данные не показаны). Таким образом, расщепление S-белка БВРС-КоВ одним из катепсинов или кальпаином было необходимо для запуска S-опосредованного слияния мембран и проникновения вируса при низком pH в эндосомы.
Как сообщалось ранее [41], в клетках Vero E6 10 мкМ ингибитора катепсина L III, специфического и необратимого ингибитора катепсина L, значительно ингибировали вход, опосредованный белком SARS S, но не ингибировал вход, опосредованный VSV-g (рис. 3B). ).Ингибитор катепсина L III снижал проникновение в клетки Vero E6 псевдовирионов MERS с нерасщепленным S-белком на 97% по сравнению с проникновением без ингибитора (фиг. 3B), и аналогичные результаты наблюдались в клетках LLCMK2 (данные не показаны). Таким образом, белок S БВРС-КоВ на псевдовирионах должен расщепляться в эндосомах за счет активированной кислотой цистеиновой протеазной активности катепсина L, чтобы запустить рецептор-зависимое проникновение в клетки Vero E6 и LLCMK2.
Расщепление трипсином S MERS-CoV на псевдовирионах, адсорбированных на рецепторах на поверхности клетки, запускает проникновение вируса на плазматическую мембрану при нейтральном pH.
SARS-CoV может проникать в чувствительные клетки через плазматическую мембрану вместо эндоцитоза, если вирионы, адсорбированные при 4 ° C на ACE2 на клеточной мембране, обрабатываются трипсином, а затем нагреваются до 37 ° C в присутствии ингибитора эндосомных подкисление [21].
Обработка трипсином при 4 ° C или 37 ° C расщепляла белок S псевдовирионов MERS и генерировала субъединицу ~ 65 кДа в домене S2 белка, распознаваемого антителами к белку MHV-A59 S (рис. S1). Псевдовирионы MERS с нерасщепленным S-белком адсорбировались при 4 ° C на рецепторах клеточной поверхности на клетках Vero E6 в присутствии 20 мМ NH 4 Cl, а затем клетки со связанными вирионами кратковременно обрабатывались трипсином при pH 7,4 при комнатной температуре до расщепляют белок S размером ~ 200 кДа и активируют его активность слияния мембран.Фигуры 3A и 4A показывают, что NH 4 Cl сильно ингибирует инфицирование клеток Vero E6 псевдовирионами MERS с нерасщепленным S. Однако обработка трипсином псевдовирионов MERS, связанных при нейтральном pH и 4 ° C с клеточной мембраной Vero E6, запускала оба вируса. проникновение в плазматическую мембрану и образование небольших синцитий через 40 часов после инокуляции (рис. 4A и B). Таким образом, связывания рецептора вместе с расщеплением протеазой и активацией S при нейтральном pH было достаточно для запуска входа псевдовирионов MERS и образования синцитий.
В этом эксперименте слияние мембран не зависело от синтеза S-белка, но образование синцитий опосредовано расщепленным S-белком на псевдовирионах, адсорбированных на рецептор вируса на клеточной мембране. Хотя кислый pH необходим для активации активности катепсина L, которая позволяет псевдовирионам MERS проникать в эндосомы, низкий pH не требуется для конформационных изменений расщепленного трипсином белка S MERS-CoV, которые опосредуют проникновение на плазматическую мембрану.
Рис. 4. Активация трипсином входа псевдовирионов MERS на плазматическую мембрану при нейтральном pH и образование S-опосредованного MERS-CoV образования синцитиев.
(A) Псевдовирионы MERS или псевдовирионы без спайк-контроля были адсорбированы на клетках Vero E6 при 4 ° C, затем кратковременно обрабатывались только трипсином или средой, а затем ингибитором трипсина в присутствии или в отсутствие NH 4 Cl для ингибирования подкисления эндосом. Поступление псевдовируса количественно оценивали по активности люциферазы через 40 часов после введения.
(B) В том же эксперименте добавление трипсина активировало S-опосредованное образование рассеянных синцитий (черные стрелки) в клетках Vero E6 с адсорбированными псевдовирионами MERS как в присутствии, так и в отсутствие NH 4 Cl при 40 часах пи.(C) Клетки 293T, стабильно трансфицированные плазмидой, кодирующей белок SΔ16 MERS-CoV, или без спайков, кратковременно предварительно обрабатывали трипсином при 4 ° C, затем ингибитором трипсина сои и затем совместно культивировали с клетками Vero E6 в течение 20 часов, или совместно культивировали с клетками Vero E6 в течение 20 часов в непрерывном присутствии трипсина. Образование синцитий требовало экспрессии на клетках Vero E6 рецептора MERS-CoV, а также расщепления трипсином белка S MERS-CoV, но не требовало кислого pH.
https: // doi.org / 10.1371 / journal.pone.0076469.g004
Расщепление трипсином белка S БВРС-КоВ, экспрессированного на поверхности клетки, индуцирует образование синцитий в клетках Vero E6
Клетки 293T, экспрессирующие нерасщепленный белок S БВРС-КоВ, или контрольные клетки, стабильно трансфицированные пустым вектором pcDNA3.
1, накладывали на монослои клеток Vero E6 в присутствии или в отсутствие трипсина TPCK (рис. 4С). Клетки 293T с пустым вектором или клетки 293T, экспрессирующие SΔ16 БВРС-КоВ без трипсина, не индуцировали образования синцитий (рис. 4C), но добавление трипсина TPCK к среде запускало образование массивных синцитий в клетках Vero E6, совместно культивируемых в течение 20 часов. с клетками 293T, экспрессирующими MERS-CoV S (фиг. 4C, стрелки).Большие синцитии также образовывались даже после короткой 20-минутной предварительной обработки трипсином при pH 7,4 и 4 ° C клеток 293T, экспрессирующих белок S MERS-CoV, с последующей инкубацией с 5-кратным избытком ингибитора трипсина сои перед нанесением слоев на клетки. конфлюэнтные монослои клеток Vero E6 и инкубирование при 37 ° C в течение 20 часов (рис. 4C, нижняя центральная панель, стрелки). Таким образом, расщепление трипсином при нейтральном pH белка S БВРС-КоВ на клетках 293T запускало образование синцитий, когда S был связан с рецепторами на чувствительных клетках Vero E6.
Влияние TMPRSS-2 и -4 на проникновение псевдовируса MERS и образование синцитиев в клетках 293T
Трансмембранные сериновые протеазы типа II, включая TMPRSS-2 и TMPRSS-4, которые, как и трипсин, экспрессируются в дыхательных путях, играют важную роль в запуске проникновения вируса гриппа A, метапневмовируса человека и бета-коронавируса SARS в группе b [19,20, 42–45]. Поэтому мы трансфицировали клетки 293T плазмидами, кодирующими TMPRSS-2 или -4, белок SΔ16 MERS-CoV, psPAX2 и pLenti-GFP-Luc, и исследовали, расщепляются ли S-белки псевдовирионов, продуцируемых в этих клетках, и могут ли они инфицировать клетки Vero E6 в клетках. наличие NH 4 Cl.Удивительно, но продуцирующие псевдовирионы клетки 293T, экспрессирующие либо TMPRSS-2, либо -4, образовали большие синцитии через 40 часов после трансфекции (фиг. 5A), но псевдовирионы MERS, продуцируемые этими клетками, не могли трансдуцировать клетки Vero E6 в присутствии или в отсутствие NH 4 Cl (Рисунок 5B).
Напротив, без TMPRSS-2 или -4 клетки 293T, экспрессирующие нерасщепленный SΔ16 БВРС-КоВ, не образовывали синцитии, а псевдовирионы, которые они продуцировали, эффективно инфицировали клетки Vero E6, но проникновение вируса ингибировалось NH 4 Cl (рис. 5B). ).Иммуноблоты с антителом АО4 к MHV S или анти-FLAG (данные не показаны) показали, что псевдовирионы MERS, продуцируемые в клетках 293T, экспрессирующих TMPRSS-2 или -4, содержат мало иммунореактивного S-белка или фрагментов S.
Рисунок 5. Влияние TMPRSS-2 и TMPRSS-4 на S-опосредованное образование синцитиев MERS-CoV в клетках 293T и проникновение псевдовируса MERS в клетки Vero E6.
(A) Коэкспрессия в клетках 293T трансмембранных сериновых протеаз TMPRSS-2 или TMPRSS-4, а также псевдовирионов MERS индуцировала образование синцитий в клетках 293T, экспрессирующих репортерный ген GFP, визуализированная через 40 часов после трансфекции.(B) Псевдовирионы MERS или псевдовирионы без спайк-контроля, высвобожденные из клеток на Фигуре 5A, были инокулированы в клетки Vero E6 в присутствии (полосатые столбцы) или в отсутствие (белые столбцы) 20 мМ NH 4 Cl для ингибирования подкисления эндосом.
https://doi.org/10.1371/journal.pone.0076469.g005
Обсуждение
Хотя новый бета-коронавирус группы c MERS-CoV очень вирулентен для человека и может инфицировать клетки нескольких различных видов, включая людей, обезьян, свиней и некоторые виды летучих мышей [10,16,34], мало что известно о биологии этого вируса.Поскольку спайковый гликопротеин необходим для проникновения коронавируса, выяснение функций спайка БВРС-КоВ может дать ценную информацию о патогенезе БВРС-КоВ и предложить возможные терапевтические вмешательства. Здесь мы использовали псевдовирионы лентивируса с белком-спайком БВРС-КоВ для изучения S-опосредованного входа в клетки на уровне биобезопасности 2.
Мы обнаружили, что псевдовирионы MERS, такие как инфекционные вирионы MERS-CoV [10,34], легко заражали линии Vero E6 и LLCMK2 клеток почек обезьян, несколько линий респираторных эпителиальных клеток человека и эмбриональные клетки летучих мышей Eptesicus fuscus .
Другие недавно также продемонстрировали, что клетки дыхательных путей человека, а также первичные клетки бронхов и альвеолярные клетки человека восприимчивы к БВРС-КоВ в соответствии с тяжелым респираторным заболеванием у пациентов с БВРС [10,33,35,46]. Muller et al. [34] недавно сообщили, что БВРС-КоВ может инфицировать клетки четырех родов летучих мышей Старого Света, Rousettus, Rhinolophus, Pipistrellus и Myotis , и одного рода Нового Света, Carollia . Мы обнаружили, что псевдовирионы MERS также могут инфицировать клетки одной летучей мыши Нового Света, E.fuscus , но не от другого, T. brasiliensis . Способность БВРС-КоВ инфицировать клетки многих видов млекопитающих напрямую и без адаптации [47], включая множество летучих мышей Старого и Нового Света, предполагает, что рецептор БВРС-КоВ, DPP4 [28], в целом является сохраняется среди многих видов, что является важным свойством многих появляющихся вирусов [47, 48]. E. fuscus летучих мышей, широко известных как большие коричневые летучие мыши, — летучие мыши, с которыми чаще всего встречается человек в Северной Америке, и они являются резервуаром для альфа-коронавируса [49,50].
Будет важно узнать, восприимчивы ли эти летучие мыши Нового Света к БВРС-КоВ или родственным бета-коронавирусам группы c. Недавнее обнаружение у летучих мышей N. laticaudatus в Мексике бета-коронавируса группы c с 96% сходством с MERS-CoV [13] в сочетании с разнообразным набором альфа-коронавирусов, ранее обнаруженных у североамериканских летучих мышей [49-52], оправдывает увеличение эпиднадзор для выявления дополнительных видов летучих мышей Нового Света, которые также могут быть носителями бета-коронавирусов группы c, таких как MERS-CoV, или других коронавирусов, способных вызывать тяжелые заболевания у людей.
MERS-CoV — это бета-коронавирус из группы c, и мы были удивлены, что его S-белок был распознан в иммуноблотах поликлональными антителами к спайковому белку MHV-A59, группе бета-коронавирусов. Перекрестно-реактивный эпитоп (ы) был сопоставлен с доменом S2, который является более консервативным, чем домен S1 бета-коронавирусов. Чан и др. [33,53] обнаружили, что белок S БВРС-КоВ распознается в иммунофлуоресценции и in vitro, в анализах нейтрализации сыворотками некоторых выздоравливающих пациентов с SARS, и предположили, основываясь на биоинформатике, что эпитоп (ы) в S2 может объяснять наблюдаемые серологическая перекрестная реактивность.
Эти наблюдения о том, что S-белок БВРС-КоВ, бета-коронавируса группы c, содержит перекрестно реагирующие эпитопы с S-белками как некоторых бета-коронавирусов группы b (SARS-CoV), так и группы a (MHV), указывают на то, что серологические исследования могут неточно различать разные филогенетические группы бета-коронавирусов. Идентификация и характеристика перекрестно реагирующего эпитопа (ов) является важным приоритетом исследования, чтобы показать, существует ли общий эпитоп в S, который можно было бы использовать в качестве иммуногена для вакцинации против всех бета-коронавирусов.
Вирусы в оболочке инфицируют клетки путем слияния вирусной оболочки с мембранами клетки-хозяина, процесса, опосредованного серией конформационных изменений слитого белка вируса, которые регулируются связыванием рецептора, активацией протеазы и / или pH [17]. Классы вирусных слитых белков определяются на основе их структур и конформационных изменений во время слияния мембран. Большинство слитых белков вируса класса I требуют протеолитического расщепления перед гидрофобным слитым пептидом в вирусном спайк-белке, чтобы эти конформационные изменения произошли, а также последующих этапов, которые запускают слияние мембран, включая связывание с рецептором, таким как gp120 ВИЧ, низкий pH в эндосомах.
как HA гриппа, или оба типа вируса лейкоза саркомы птиц (ASLV) [9,17,54–56].Коронавирусы в разных филогенетических группах различаются последовательностью шагов, ведущих к проникновению вируса [57,58]. Белок S на вирионах группы a бета-коронавируса MHV-A59 требует активации протеазы — либо фурином во время созревания вируса [18], либо трипсином или другими сериновыми протеазами во внеклеточных жидкостях перед связыванием рецептора, либо катепсином в эндосомах при кислом pH — запускать конформационные изменения, которые приводят к слиянию мембран и проникновению вируса [59]. Напротив, вирионы бета-коронавируса SARS-CoV группы b, которые содержат нерасщепленный S [22], сначала связываются с вирусным рецепторным белком, ACE2, и подвергаются эндоцитозу, а затем S расщепляется внутри эндосомальных везикул кислотозависимым катепсином L, обеспечивая конформационный изменения в S, которые приводят к проникновению вируса [21,22,60].
Здесь мы проанализировали шаги, необходимые для запуска конформационных изменений в S MERS-CoV и их роли в проникновении вируса и формировании синцитиев.
В нашей лаборатории псевдовирионы MERS, высвобождаемые клетками 293T, содержали только нерасщепленный белок S, и, как и для большинства коронавирусов, расщепление между S1 и S2 было необходимо для обеспечения его активности слияния мембран. Псевдовирионы MERS связывались с рецепторами на чувствительных клетках и подвергались эндоцитозу, а внутри эндосом расщепление S посредством кислотозависимой цистеиновой протеазы, опосредованной катепсином L, проникновением вируса.Gierer et al [33] пришли к аналогичным выводам, используя псевдовирионы MERS, которые, в отличие от нашего, содержали больше расщепленного, чем нерасщепленного S-белка, хотя обе лаборатории создали псевдовирионы в клетках 293T. Gierer et al. [33] показали, что партии клеток 293T заметно различаются по экспрессии рецептора MERS-CoV и чувствительности к трансдукции псевдовирионами MERS. В нашей лаборатории клетки 293T показали минимальную чувствительность к трансдукции псевдовирионов БВРС-КоВ с нерасщепленным S-белком.
Помимо проникновения посредством эндоцитоза, мы показали, что, как и SARS-CoV [21,22], псевдовирионы MERS могут проникать в чувствительные клетки Vero E6 на плазматической мембране, если вирионы сначала связываются с рецепторами клеточной поверхности при 4 ° C и нейтральном pH.
в присутствии NH 4 Cl для ингибирования подкисления эндосом, а также кратковременную обработку трипсином при комнатной температуре для расщепления вирусного S-белка.При нагревании до 37 ° C при нейтральном pH псевдовирионы MERS сливались с плазматической мембраной и трансдуцировали клетки. Таким образом, белок MERS S не требует подкисления, чтобы опосредовать проникновение вируса, а подкисление, необходимое для проникновения в эндосомы [33], было необходимо для активации протеазной активности катепсина. Хотя обработка вирионов или псевдовирионов коронавируса протеазами может активировать проникновение вируса, это также может привести к потере инфекционности, если расщепленный гетеродимер S1 / S2 диссоциирует до связывания с рецептором.Мы обнаружили, что псевдовирионы MERS, высвобождаемые из клеток, экспрессирующих TMPRSS-2, содержали пониженное количество S-белка и утратили способность трансдукции чувствительных клеток. Мы постулируем, что псевдовирионы MERS, которые содержат большие количества расщепленного S-белка, детектируемого с-концевой меткой [33,53], не могут проникать в клетки на плазматической мембране, потому что S1 может диссоциировать от расщепленных шипов на вирионах. Для проверки этой гипотезы необходима разработка антител, специфичных к домену S1 белка S MERS.
Белки S коронавируса, экспрессируемые на клеточных мембранах, могут запускать рецептор-зависимое образование синцитий, если связанный с мембраной S-белок расщепляется в инфицированных клетках фурином или другими протеазами. Инфекция БВРС-КоВ клеточных линий Calu-3 и Caco-2 индуцировала образование синцитиев [35]. Наши клетки 293T были лишь минимально восприимчивы к проникновению MERS-псевдовирионов и не образовывали синцитии при продуцировании псевдовирионов MERS с нерасщепленным S. Однако, когда клетки 293T, экспрессирующие белок SΔ16 MERS-CoV, совместно культивировали в присутствии трипсина с Vero E6 из клеток, экспрессирующих рецептор БВРС-КоВ, образовались огромные синцитии.Эти наблюдения предполагают, что в тканях, таких как легкие, где доступны трипсин, TMPRSS-2 или -4 и HAT и другие сериновые протеазы, вирусная инфекция MERS-CoV может напрямую передаваться от клетки к клетке через S-опосредованные рецептор-зависимые синцитии.
образование, потенциально ускользающее от вирус-нейтрализующих антител, как и другие синцитиальные вирусы, такие как респираторно-синцитиальный вирус, вирусы парагриппа и кори. Будет важно узнать, образуются ли синцитии в легких или других тканях пациентов с БВРС-КоВ или животных моделей БВРС-КоВ.
Некоторые белки S коронавируса также могут запускать рецепторнезависимое образование синцитий [61,62]. Когда S-белки, экспрессируемые на плазматической мембране, расщепляются, домен S1 может отделиться от шипа, обнажая гидрофобный слитый пептид закрепленного на мембране домена S2, который может напрямую индуцировать слияние с любыми соседними клеточными мембранами или липидными бислоями, даже если у них отсутствуют рецепторы. . Это «рецепторнезависимое распространение (RIS)» позволяет инфицированной клетке сливаться с соседними неинфицированными рецепторнегативными клетками, которые, в свою очередь, могут продуцировать вирус и сливаться с дополнительными рецепторнегативными клетками. Активность RIS зависит от стабильности взаимодействий S1 / S2, а низкая стабильность гетеродимеров S1 / S2 коррелирует с быстрым распространением инфекции через ткани, которые экспрессируют мало рецепторного белка [63,64]. Мы обнаружили, что трансмембранные сериновые протеазы TMPRSS-2 и -4 могут активировать синцитиевую активность белка SΔ16 БВРС-КоВ, экспрессируемого в клетках 293T, как эти протеазы делают для слитых белков класса 1 других респираторных вирусов, включая грипп, SARS-CoV и метапневмовирус человека. [19,20,42–45].Мы были удивлены тем, что клетки 293T, которые экспрессируют очень мало рецепторов MERS-CoV, были настолько сильно слиты, и мы предполагаем, что это образование синцитиев может быть связано с RIS.
В связи с высокой летальностью, лечение БВРС-КоВ необходимо срочно. Объединенный очищенный человеческий иммуноглобулин, содержащий нейтрализующие антитела, использовался для лечения множества инфекционных заболеваний. Неудивительно, что, поскольку БВРС-КоВ является новым патогеном, мы обнаружили, что человеческий иммуноглобулин из США не может нейтрализовать инфекционность псевдовирионов БВРС (данные не показаны).
Однако сыворотки пациентов, инфицированных либо SARS-CoV, либо MERS-CoV, содержат антитела, которые могут нейтрализовать MERS-CoV [33,53]. Большинство нейтрализующих антител, вероятно, будут нацелены на рецептор-связывающий домен S1 БВРС-КоВ S, который менее консервативен, чем домен S2, и может мутировать, вероятно, генерируя мутанты, ускользающие от антител [65]. Здесь мы показали, что поликлональные антитела к S-белку MHV из группы бета-коронавирусов перекрестно реагируют с доменом S2 S-белка MERS в иммуноблотах. Как мы и другие авторы предложили для SARS-CoVs [66,67], более высококонсервативный домен S2, и особенно его С-концевой участок гептадного повтора (HRC), могут быть важными мишенями для блокирования конформационных изменений в S, ингибируя образование синцитиев. проникновение вируса, а также выработка нейтрализующих антител.Если вирионы БВРС-КоВ, образующиеся в легких, имеют нерасщепленный белок S и поэтому должны проникать в клетки посредством эндоцитоза, то ингибирующие пептиды HRC или нейтрализующие антитела к HRC могут не проникнуть в эндосомы для предотвращения проникновения вируса.
Однако вирионы БВРС-КоВ в легких, вероятно, расщепили белок S из-за протеаз легких, так что проникновение вируса на плазматическую мембрану может быть ингибировано пептидами или антителами, нацеленными на HRC.
Таким образом, мы продемонстрировали, что, как и в случае с SARS-CoV, расщепление белка MERS-CoV-S трипсином, TMPRSS2 или -4 или катепсином L необходимо для активации активности слияния S с мембраной, что приводит к проникновению вируса и образованию синцитий. и что расположение протеазы определяет, входит ли вирус через эндоцитоз или путем слияния на плазматической мембране.S-опосредованные MERS-CoV механизмы связывания и входа и запуск протеазой конформационных изменений, необходимых для проникновения вируса MERS-CoV-S и образования синцитий, представляют собой потенциальные мишени для разработки лекарств или вакцин против этого недавно появившегося и летального бета-коронавируса человека группы c.
Материалы и методы
Конструкции и плазмиды
Оптимизированная по кодонам кДНК, кодирующая спайковый гликопротеин MERS-CoV [15], была синтезирована с заменой 16 c-концевых аминокислот линкером GGGGS и тегом FLAG (GenScript, Piscataway, NJ), а для эукариотической экспрессии была клонирована в pcDNA3.
1 (+) (Invitrogen) между сайтами BamHI и NotI . Для создания конструкций для экспрессии усеченных растворимых белков MERS S aa1-351, S aa1-384 и S aa1-748 проводили реакции ПЦР с использованием того же прямого праймера AATGAAAAGCTTCACCATGATTCACTCCGTGTTCCTC со следующими обратными праймерами для S aa1-351:
TAGTTTTCTAGAACTTCCGCCTCCACCATAA
CTACAGTGGAGCTGGCT; для S aa1-384:
TAGTTTTCTAGAACTTCCGCCTCCAC
CGTCGCACTCCACGCCTTCTGCC; или для S aa1-748 TAGTTTTCTAGAACTTC CGCCTCCACCTGGGGTCAGTGTGCTGGGGGT и клонировали в p3xFLAG-CMV 14 (Sigma, St Louis, MO) между сайтами HindIII и XbaI для экспрессии.Плазмида VSV-g и упаковывающая плазмида лентивируса, psPAX2, были получены от Addgene (Кембридж, Массачусетс). Лентивирусная репортерная плазмида pLenti-GFP-Luc, которая экспрессирует зеленый флуоресцентный белок (GFP) и люциферазу, была любезно предоставлена Фанг Ли, Университет Дьюка [68]
Клеточные линии
Линия Vero E6 клеток почек африканской зеленой мартышки, линия 293T эмбриональных клеток почек человека, трансформированных большим Т-антигеном SV40, линия Calu 3 эпителиальных клеток дыхательных путей человека, линия альвеолярных эпителиальных клеток человека A549 и легкое TB1Lu линия клеток от T.
brasiliensis летучих мышей были получены от ATCC (Манассас, Вирджиния). Клетки Hela, стабильно экспрессирующие рекомбинантные белки CEACAM человека, и контрольная линия клеток Hela, содержащая пустой вектор, были любезно предоставлены Скоттом Грей-Оуэном из Университета Торонто [69]. Клетки EFF летучих мышей получали путем мацерации плодов в середине беременности летучих мышей Eptesicus fuscus , кратковременной трипсинизации клеток и их посева для размножения. Клетки дважды пассировали, замораживали и любезно предоставил Ричард Боуэн из Университета штата Колорадо.Выделение клеток EFF было проведено в соответствии с утверждением 03-096A от Университета штата Колорадо IACUC. Мышиные клетки NIh4T3, стабильно экспрессирующие рекомбинантную человеческую аминопептидазу N (hAPN), или контрольные клетки с пустым вектором были описаны ранее [70]. Эти клеточные линии поддерживали в MEM Дульбекко с 10% фетальной бычьей сывороткой (FBS) и 2% пенициллина, стрептомицина и фугизона (PSF) (Life Technologies Inc, Гранд-Айленд, Нью-Йорк).
Линия LLC-MK2 клеток почек макаки-резуса из ATCC CCL-7 поддерживалась в Opti-MEM1 (Life Technologies Inc, Гранд-Айленд, Нью-Йорк) с 10% FBS и 2% PSF.
Производство псевдовирионов MERS и спайк-опосредованного проникновения вируса
Псевдотипированные лентивирусы были получены, как описано ранее [71], с небольшими модификациями. Вкратце, плазмиды, кодирующие вирусные гликопротеины MERS-CoV S∆16, SARS S∆19 или VSV-g, котрансфицировали в клетки 293T с помощью psPAX2 и pLenti-GFP-Luc с использованием полиэфиримида (PEI) (Polyscience Inc, Warrington, PA). Спустя 40-60 часов супернатантную среду, содержащую псевдовирионы, центрифугировали при 800 g в течение 5 минут для удаления мусора и пропускали через 0.Фильтр 45 мкм. Для количественного определения проникновения псевдовирионов в различные типы клеток 250 мкл псевдовирионов с 8 мкг / мл полибрена (Sigma) инокулировали в клетки в 24-луночных планшетах, инкубировали в течение ночи при 37 ° C, и клетки обрабатывали свежей средой.
Через 40 часов после инокуляции (pi) клетки лизировали при комнатной температуре 120 мкл среды с равным объемом Steady-glo (Promega, Madison, WI). Эффективность трансдукции контролировали путем количественного определения активности люциферазы. Живые клетки, трансдуцированные псевдовирионами, детектировали по экспрессии GFP.Для всех экспериментов были проанализированы три образца, данные представляют два или более экспериментов, и показана стандартная ошибка.
Обнаружение вирусных гликопротеинов в псевдовирионах
Псевдовирионы с MERS-CoV SΔ16, SARS SΔ19 или VSV-g гликопротеином или контрольные псевдовирионы без спайка центрифугировали через 20% сахарозную подушку при 30 000 об / мин при 4 ° C в течение 3 часов в роторе Beckman SW41 [71]. Белки спайков в вирионах разделяли на 4-15% SDS PAGE, блотировали до нитроцеллюлозы и детектировали с помощью мышиных антител M2 против FLAG (Sigma, Сент-Луис, Миссури) для MERS-CoV SΔ16 или поликлональных козьих антител AO4 для очищенных спайков от разрушенные детергентом вирионы MHV-59 [72], затем конъюгированные с пероксидазой хрена (HRP) антитела к мышиным или козьим IgG и визуализированные с помощью Chemiluminescent Reagent Plus (PerkinElmer, Бостон, Массачусетс).
Ингибирование проникновения псевдовириона лизосомотропными агентами
Клетки Vero E6 или клетки LLCMK2 инкубировали в течение 1 часа при 37 ° C только с средой или средой, содержащей либо 20 мМ NH , 4 Cl, либо 200 нМ бафиломицин А для ингибирования подкисления эндосом, а затем инокулировали псевдовирионами и контрольными элементами без спайков. присутствие либо 20 мМ NH 4 Cl, либо 200 нМ бафиломицина А в течение 90 минут при 1200 г при 4 ° C. Через 40 часов после инфицирования клетки лизировали и количественно оценивали активность люциферазы как меру проникновения вируса.На рисунке 3 люциферазная активность клеток Vero E6, трансдуцированных псевдовирионами VSV, SARS и MERS-CoVS без ингибитора эндоцитоза, составляла 1×10 6 , 1,5-2×10 6 и 5-6×10 5 , соответственно. .
Влияние трипсина на проникновение псевдовирионов, адсорбированных на клеточные мембраны
Монослои клеток Vero E6 или LLCMK2 инкубировали с 20 мМ NH 4 Cl в среде, содержащей 10% FBS, в течение 1 часа при 37 ° C, затем сдвигали на 15 минут до 4 ° C с 40 мМ NH 4 Cl.
Псевдовирионы адсорбировали на клетки при 4 ° C путем спиновой инокуляции в течение 90 мин при 1200 g. Инокулят вируса удаляли и заменяли предварительно нагретой бессывороточной средой DMEM с 20 мМ NH 4 Cl или без нее. Через 15 минут при 37 ° C среду заменяли бессывороточной DMEM с или без 15 мкг / мл TPCK-трипсина при комнатной температуре для активации активности слияния мембран S-белка на вирионах, адсорбированных на плазматической мембране. Затем активность трипсина ингибировали инкубацией в течение 15 минут на льду с 75 мкг / мл ингибитора трипсина сои (Worthington Biochemical Corporation, Лейквуд, штат Нью-Джерси) в DMEM с 10% FBS, и клетки инкубировали в течение ночи при 37 ° C, подавая свежую среду. , и инкубировали при 37 ° C.Через 40 ч после введения вируса количественно оценивали активность люциферазы, и клетки фотографировали для выявления вирусных цитопатических эффектов.
Эффекты ингибиторов катепсина при проникновении псевдовирионов MERS
Монослои клеток Vero E6 или клеток LLCMK2 предварительно инкубировали в течение 2 часов при 37 ° C либо с 30 мкМ E64D, который ингибирует катепсин B, H, L и кальпаин, либо с 10 мкМ специфического ингибитора катепсина L III (Millipore, Billerica, MA).
Псевдовирионы и контроли без спайков с ингибиторами катепсина или без них инокулировали центрифугированием на клетки при 4 ° C, затем инкубировали при 37 ° C в течение 5 часов с ингибиторами эндоцитоза или без них.Затем клетки инкубировали при 37 ° C без ингибиторов, и через 40 ч после инъекции определяли активность люциферазы в лизированных клетках.
БВРС-КоВ S∆16-опосредованное образование синцитиев
Клетки 293T в 6-луночных планшетах трансфицировали с использованием PEI с 3 мкг либо пустого вектора, либо плазмиды S∆16 MERS-CoV. Для кратковременной предварительной обработки трипсином клетки поднимали с помощью 1 мМ EDTA в PBS и промывали, затем инкубировали на льду с 20 мкг / мл трипсина TPCK или контрольной среды в течение 20 мин. Затем активность типсина подавляли инкубацией с пятикратным избытком ингибитора трипсина сои в течение 15 минут.Затем предварительно обработанные трипсином клетки 293Т и контрольные клетки наслаивали на монослои клеток Vero E6 и инкубировали в течение 20 часов.
Образование синцитиев определяли с помощью фазово-контрастной микроскопии или путем визуализации фиксированных клеток, окрашенных кристаллическим фиолетовым.
ВОЗ Саудовский отчет MERS отмечает воздействие в медицинских учреждениях
Сегодняшняя обновленная Всемирная организация здравоохранения (ВОЗ) обновленная информация о 10 недавних случаях заражения MERS-CoV в Саудовской Аравии проливает мало света на то, как люди подвергаются воздействию вируса, но половина случаев связана с возможным воздействием вируса. в больницах — проблема, которая способствовала всплеску заболеваемости в прошлом.
Также сегодня министерство здравоохранения Саудовской Аравии (МЗ) сообщило еще о двух случаях заражения коронавирусом ближневосточного респираторного синдрома (БВРС-КоВ), одна у медицинского работника (СР), а также о смерти в ранее подтвержденном случае.
Представители здравоохранения Филиппин поделились некоторыми подробностями о трех филиппинских медицинских работниках, которые недавно были заражены вирусом во время работы в Саудовской Аравии.
Два новых дела о MERS в Саудовской Аравии
Минздрав подробно рассказал о случаях MERS-CoV сегодня в Эр-Рияде и Джидде.
Случай в Эр-Рияде касается 48-летней работницы-эмигрантки, работающей в сфере здравоохранения. По данным Минздрава, ее состояние стабильно, и она контактировала с пациентом с БВРС-КоВ в медицинских учреждениях. В последнее время она не контактировала с животными или MERS в сообществе, а также не страдала другими заболеваниями.
Пациент из Джидды — 59-летняя саудовская женщина, не работающая в сфере здравоохранения. Она госпитализирована в критическом состоянии, у нее ранее было заболевание, и она недавно имела неустановленный контакт с животным. Ранее она не контактировала с пациентами с БВРС-КоВ.
Минздрав также сообщил, что 57-летний саудовец в Эр-Рияде скончался от этой болезни. Он не был медработником, но у него уже было заболевание. Агентство также сообщило, что 53-летний саудовец в Эр-Рияде вылечился от инфекции. Он также не является медработником и болел ранее.
По сегодняшним данным, число случаев БВРС-КоВ в Саудовской Аравии составляет 938 случаев и 403 случая смерти. В Минздраве также отметили, что 508 пациентов выздоровели, а 27 все еще находятся на лечении.
В марте в стране уже было 18 случаев MERS, 14 из которых зарегистрированы в Эр-Рияде, и зарегистрировано 8 случаев смерти, связанных с MERS.Это последовало за всплеском в феврале, когда было зарегистрировано 75 случаев БВРС-КоВ и 31 смерть.
ВОЗ подчеркивает воздействие медицинских учреждений
О 10 случаях в сегодняшнем обновлении ВОЗ было сообщено агентству в период с 23 по 25 февраля. Заболевание началось с 12 февраля по 22 февраля, и семь пациентов госпитализированы в критическом состоянии, а трое находятся в критическом состоянии. указан как стабильный. Пятеро пациентов из Эр-Рияда.
Семь пациентов — мужчины, все взрослые в возрасте от 24 до 84 лет.Пятеро из них страдают серьезными заболеваниями.
Трое из пациентов — двое в Эр-Рияде и один в Афифе — были инфицированы БВРС-КоВ, когда они находились в больнице из-за несвязанных состояний, и все они находились в учреждениях, где недавно были выявлены другие случаи заболевания.
Однако сообщалось, что двое не лечились одними и теми же медработниками, а третий не контактировал со случаем, о котором ранее сообщала ВОЗ.
Двое из 10 зарегистрированных сегодня пациентов — это медработники, 50-летний мужчина и 62-летняя женщина.Оба лечили лабораторно подтвержденного пациента БВРС-КоВ во время работы в Эр-Рияде.
Один из пациентов, 45-летний иностранец, контактировал с ранее подтвержденным пациентом, 47-летним иностранцем, болезнь которого была описана в последнем обновлении ВОЗ от 23 февраля. не был описан как связанный со здоровьем. Оба пациента из Наджрана.
Представители здравоохранения все еще расследуют, как еще четверо пациентов заразились вирусом.
ВОЗ также сообщила, что Саудовская Аравия уведомила ее о двух смертельных случаях среди ранее зарегистрированных пациентов с БВРС-КоВ.В нем говорится, что последние уведомления из Саудовской Аравии увеличили общее количество случаев заболевания в мире до 1040 лабораторно подтвержденных случаев и не менее 383 смертей.
Большинство случаев зарегистрировано в Саудовской Аравии.
Агентство призвало страны продолжать наблюдение за тяжелыми респираторными инфекциями и внимательно следить за любыми необычными паттернами. ВОЗ напомнила медицинским учреждениям, что меры по профилактике и контролю инфекций имеют решающее значение для борьбы с этим заболеванием и что, поскольку ранние признаки инфекции БВРС-КоВ неспецифичны, медицинские работники должны принимать стандартные меры предосторожности со всеми пациентами, независимо от их диагноза.
Филиппинские медработники среди недавних случаев
Министерство иностранных дел Филиппин (DFA) объявило сегодня, что трое филиппинских медицинских работников в Саудовской Аравии заразились инфекцией MERS-CoV, согласно отчету ABS-CBN, одного из крупнейших в стране. телевизионные сети.
Там сказано, что все женщины, которые работали в разных больницах Саудовской Аравии. Двое — медсестры, а один — техник-респиратор.
DFA не сообщило никаких других подробностей, за исключением того, что одной из женщин 56 лет, и что работникам была оказана немедленная медицинская помощь и они находятся в изоляции.
Он также отметил, что с 2013 года, когда впервые появился БВРС-КоВ, девять филиппинцев умерли от инфекций, восемь из Саудовской Аравии и один из Объединенных Арабских Эмиратов.
Редакционный директор Джим Ваппес участвовал в написании этой статьи.
См. Также:
6 марта Обновление ВОЗ по MERS-CoV
6 марта Заявление Минздрава
6 марта Отчет ABS-CBN
Сетевой анализ коронавируса MERS в домохозяйствах, сообществах и больницах для выявления наиболее централизованных и Сверхраспространение на Аравийском полуострове, 2012–2016 гг.
История контактов имеет решающее значение во время вспышки инфекционного заболевания и жизненно важна для понимания и прогнозирования распространения инфекционных заболеваний среди населения.Сети передачи данных людей, инфицированных высококонтагиозным коронавирусом ближневосточного респираторного синдрома (БВРС-КоВ) в Саудовской Аравии, были оценены для выявления случаев сверхраспространения среди инфицированных пациентов в период с 2012 по 2016 год.
Из 1379 случаев MERS, зарегистрированных в течение периода исследования 321 (23,3%) случай был связан с госпитальной инфекцией, из которых 203 (14,7%) случая произошли среди медицинских работников. Было зарегистрировано 1113 отдельных случаев, в то время как количество зарегистрированных контактов на одного пациента с MERS составляет от 1 () до 17 (), со средним значением 0.27 (SD = 0,76). Пять сверхважных узлов были идентифицированы на основании большого количества связанных контактов, заслуживающих определения приоритета (как минимум, степень 5). Количество вторичных случаев в каждом SSE варьируется (от 5 до 17). Центральность собственного вектора была в значительной степени () связана с местом воздействия, при этом в больницах центральность собственного вектора в среднем была значительно выше, чем в других местах воздействия. Результаты показали, что медицинский работник в среднем имеет более высокий балл центральности собственного вектора, чем не медицинский работник.Патогенные капли легко передаются в закрытых помещениях больниц; поэтому необходимо принять меры контроля, чтобы сократить количество посетителей больниц и перемещений второстепенного персонала в медицинском учреждении со случаями MERS.
1. Введение
Коронавирус ближневосточного респираторного синдрома (БВРС-КоВ) — это заразный респираторный патоген, который передается при тесном контакте с инфицированными людьми. Взаимодействие между отдельными людьми может способствовать сверхраспространению инфекционных заболеваний среди людей или животных, и обычно наиболее интенсивно среди людей, находящихся в непосредственной близости друг от друга.БВРС-КоВ впервые был зарегистрирован у 60-летнего мужчины в районе Биша в Королевстве Саудовская Аравия в 2012 году [1]. Сейчас он распространился в 27 странах на 4 континентах. Большинство зарегистрированных случаев заболевания проживали или путешествовали в районы, прилегающие к Аравийскому полуострову [2]. Из-за прерывистой передачи, которая произошла от животного к человеку [1, 3], многие случаи передачи вируса от человека к человеку также были зарегистрированы в семьях и медицинских учреждениях [3–7].
Во время вспышки инфекционного заболевания, такого как БВРС-КоВ (или сокращенно БВРС), передача обычно формирует сети инфицированных людей (кластер вспышек), вероятно, из-за того, как вирус передается от одного инфицированного человека другому восприимчивому человеку.
Другими словами, источником заражения может быть прямая или косвенная связь [8]. В сетевом анализе цель состоит в том, чтобы идентифицировать наиболее важных инфицированных пациентов (также называемых узлами), которые играют важную роль в сверхраспространении, и использовать местоположение узла в сети, чтобы предсказать, какие пациенты (узлы), вероятно, будут заражены [9]. Эти важные пациенты имеют влияние, поскольку они заражают непропорционально большое количество вторичных контактов [10, 11].
События сверхраспространения (SSE) являются результатом того, что люди (агенты SSE), укрывающие вирус, заражают непропорционально больше вторичных контактов по сравнению с большинством других [7, 10, 11].Следовательно, SSE состоит из большого кластера инфекции, в котором некоторые люди заражают намного больше других людей, тем самым действуя как агенты для SSE. В этом исследовании сверхраспространение было определено как наличие как минимум пяти контактов. SSE были зарегистрированы во время других вспышек инфекционных заболеваний, таких как SARS в Пекине в 2003 г.
[12] и совсем недавно Эбола в Западной Африке, 2014–2015 гг. [13, 14], и MER-CoV в Южной Корее, 2015 г. [10].
Знание сети связи людей имеет решающее значение в распространении инфекционных заболеваний, передающихся через патогенные капли, таких как респираторная инфекция, MERS и Эбола.Как и в случае MERS, случайные кластеры большего размера не должны быть неожиданными, как, например, вспышка в Южной Корее [7]. Несмотря на различия в масштабах передачи MERS от человека к человеку, подчеркивается его высокая вариабельность и неоднородность в возможностях передачи [15, 16].
На протяжении многих лет исследователи изучали, как знание сетевых структур может повлиять на меры общественного здравоохранения. Например, сетевой анализ, основанный на центральности подключения, использовался для выявления людей с высоким риском для целевой вакцинации в целях сдерживания распространения инфекционных заболеваний [17].Сетевой анализ был использован для изучения того, была ли плотность сетевых контактов лиц, инфицированных Mycobacterium tuberculosis , с большей вероятностью иметь положительный результат теста на туберкулез (ТБ) по сравнению с возникновением кластеров ТБ, обнаруженных через сетевые соединения с кластерами, обнаруженными с помощью молекулярного генотипирования.
[18]. Точно так же влияние белок-белковых взаимодействий внутри интерактома хозяин-патоген исследовали с помощью сетевого анализа на приспособленность патогена во время инфекции [19].
Основное внимание в этом исследовании уделялось отображению и измерению взаимосвязей и потоков между людьми, инфицированными MERS, а также исследованию структуры передачи MERS с помощью сети и графиков. Взаимодействия и связи пациентов были получены путем отслеживания контактов в течение 14 дней до начала заболевания. Структура сетевых подключений поможет выявить наиболее влиятельные контакты, в то время как показатели централизации сети использовались для исследования вклада и характеристик агентов сверхраспространения в заражение и распространение MERS.И, наконец, роль, которую играют атрибуты пациента (свойство узла), была исследована в качестве эпидемического усилителя или аттенюатора посредством проверки гипотез.
2. Материалы и методы
2.1. Источники данных
Это исследование основано на индивидуальном списке клинически подтвержденных случаев БВРС, представленном доктором Рамбо [20].
Основное внимание уделяется 1379 случаям MERS, зарегистрированным в Королевстве Саудовская Аравия в период с июня 2012 года по сентябрь 2016 года. В данном исследовании учитывались следующие переменные: возраст, пол, тип пациента (независимо от того, является ли пациент медицинским работником (МР) или другим работником). , последствия для здоровья (мертвые или живые) на последний день наблюдения, статус сопутствующей патологии пациента, типы воздействия известных факторов риска (контакт с животными и контакт с верблюдами косвенно или напрямую или через потребление продуктов из верблюдов) и место заражения (классифицируется как больница, община и домохозяйство / семья).Набор данных был перекрестно подтвержден с информацией из новостей ВОЗ о вспышках болезней и веб-сайта управления MERS Саудовской Аравии.
2.2. Область исследования
Королевство Саудовская Аравия (КСА) — основная часть полуострова, ограниченная Красным морем на западе, Аденским заливом на юге, Оманским заливом на юго-востоке и Персидским заливом на востоке.
KSA имеет площадь около 2150 000 квадратных километров и граничит с несколькими странами, такими как Иордания и Ирак на севере, Катар, Бахрейн, Кувейт и Объединенные Арабские Эмираты на востоке, а также Оман и Йемен на юге.Страна расположена на широте 15,66–32,15 и долготе 34,5–55,67 (рис. 1). КСА делится на 13 регионов (Манатик, административный уровень 1) и 118 провинций (Мухафазат, административный уровень 2). Всемирный банк по состоянию на 2014 год оценил его население в 30,89 миллиона человек [21].
2.3. Определения, отслеживание контактов и социально-демографические переменные
пациентов с MERS были клинически подтверждены с помощью РНК-положительной цепи вируса в реальном времени с использованием полимеразной цепной реакции с обратной транскрипцией (ОТ-ПЦР) с положительной ПЦР по крайней мере на двух конкретных геномных мишенях, вышестоящим белком E (upE) и ORF1a, или единственная положительная мишень (upE) с секвенированием второго целевого анализа RdRpSeq или гена (анализ NSeq) [6, 22].
Расследование контактов пациентов проводилось должностными лицами больницы путем отслеживания истории контакта пациента с другими известными факторами риска, такими как контакт с другими лабораторно подтвержденными случаями MERS, контакт животных / верблюда или посещение других мест, которые, как известно, связаны с случаями MERS, за 14 дней до этого. до появления симптомов. Под пациентом, контактировавшим с животными, подразумевается пациент, имевший исторический контакт с животными, в то время как пациенты, контактировавшие с верблюдами, были теми, кто работал на верблюжьем рынке или имел историю контактов с верблюдами, или потребляли продукты из верблюда за 14 дней до появления симптомов.
Медицинский работник — это любой, кто работает в медицинском учреждении (весь персонал, такой как врачи, медсестры, персонал лаборатории, ценные бумаги и администраторы). Считается, что у пациента имеется сопутствующая патология, если он или она страдает сопутствующими хроническими заболеваниями или заболеваниями или был госпитализирован из-за несвязанных заболеваний.
Место воздействия классифицируется как (а) госпитальная инфекция, если инфекция произошла в больнице, например, медицинский работник / посетитель больницы / амбулаторный пациент заразился заболеванием в медицинском учреждении, (б) семейная инфекция, если инфекция произошла через семью. или (c) инфекция в сообществе, если инфекция заразилась вне больницы или домашнего хозяйства, например, в школах, на рабочем месте, в палатках для хаджа и т. д.
2.4. Статистический анализ
Описательный анализ проводился по некоторым социально-демографическим переменным, представленным в виде среднего и стандартного отклонения для возраста, а также частот и процентов для других категориальных переменных. Распространенность болезни MERS в сообществах, домохозяйствах и больницах проверялась с помощью статистики хи-квадрат для категориальных переменных, в то время как тест t использовался для непрерывных переменных (таблица 1).
| |||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||
Примечание . a Возраст: в 5 (0,4%) случаях возраст отсутствует. b Пол: 18 (1,3%) случаев неизвестного пола. c Медицинский работник: 516 (37,4%) неизвестный или несекретный статус медицинского работника. d Коморбидность: 338 (24,5%), статус коморбидности неизвестен или не классифицирован. e История контактов: 750 (54,4%) неизвестный источник / место воздействия. | |||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||
73 (19,06)
40%)
f Контакт с животными: 838 (60,8%) контактов с животными неизвестны. г Контакты с верблюдами: 867 (62,9%) неизвестных контактов с верблюдами. Единицами сетевого анализа в этом исследовании являются узлы, представляющие людей, инфицированных MERS, в семьях, больницах или сообществах, которые связаны через ребра. Визуализация сети эпидемии и сетевой анализ проводились в пакете R «igraph» [23] и UCINET 6.0 Version 1.00 [24]. Мы использовали показатели центральности, чтобы измерить структурную важность пациентов (узлов) в сети.«Степень центральности» узла использовалась для выявления наиболее активных узлов в сети и того, насколько хорошо узел связан со своими соседями — степень узла — это количество краевых инцидентов на узле. «Центральность промежуточности» использовалась для измерения количества пар узлов, к которым узел может быть подключен по кратчайшему пути, в то время как «центральность близости» использовался для измерения того, насколько заразен инфицированный пациент (узел) для других [9, 17, 24, 25].
Аналогичным образом, «центральность по двум досягаемости» использовалась для исследования доли узлов, которые могут достичь заданного узла за 2 шага или меньше, в то время как «центральность по собственному вектору» использовалась для измерения важности узла в зависимости от важности его соседей.На рисунках 2 (a) –2 (d) показаны различные показатели централизации сети.
| ||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||
004) Наконец, было исследовано влияние атрибутов пациента на их положение в сети (измеряемое метриками центральности сети), и была исследована взаимосвязь между двумя (или более) метриками централизации сети. Мы использовали тесты перестановки в UCINET 6.0 версии 1.00 [24], чтобы конкретно проверить следующие аспекты: (1) больше ли центральных пациентов являются медработниками или нет, (2) произошло ли больше центральных инфекций в больнице или сообществе, и (3) как Например, большая часть различий в центральности промежуточности пациентов может быть объяснена, например, их исходной степенью.
3. Результаты
3.1. Описательные резюме
В течение периода исследования в KSA было зарегистрировано 1379 случаев MERS, большинство случаев произошло в Ар-Рияде (46,7%) и Мекке (24,3%). Общий общий коэффициент летальности (CFR) составляет 33,79% (466 смертельных случаев в 1379 случаях) (Таблица 1). Среди мужчин было больше случаев (901, 65,3%), чем среди женщин (460, 33,4%). Средний возраст инфицированных MERS пациентов составлял 51,7 года, 82% всех случаев приходились на людей в возрасте от 25 до 74 лет. Высокая доля случаев БВРС наблюдалась среди пациентов мужского пола в возрасте от 30 до 74 лет (76% случаев среди мужчин) и среди пациентов женского пола в возрасте от 25 до 74 лет (85% случаев среди женщин) (Таблица 1 и Рисунок 3).
Смертность от MERS увеличивается с возрастом, 11% случаев инфекции приходится на пожилых мужчин в возрасте 55–59 лет, и более смертельным исходом являются мужчины старшего возраста (старше 50 лет). Аналогичным образом, 85% летальных исходов среди женщин приходятся на женщин старше 50 лет.
Большая часть (около 79%) пациентов ранее имели какое-либо заболевание (сопутствующие заболевания). Количество пациентов с сопутствующей патологией незначительно варьировалось по регионам. Летальный исход у пациентов с сопутствующей патологией был выше, чем у пациентов без какой-либо сопутствующей патологии.Около 47% людей с каким-либо заболеванием умерли от болезни, по сравнению с 17% пациентов без каких-либо заболеваний.
Результаты показали, что около половины случаев (629 (45,6%)) были связаны как минимум с одним местом воздействия, из которых 321 (23,3%) были связаны со вспышками в больницах (Таблица 1). Было выявлено 750 (54,4%) случаев, контактный анамнез которых был неизвестен. Из 321 случая, связанного со вспышками в больницах, более одной трети () произошли среди медицинских работников, т.е. около 58.7% всех случаев с участием медицинских работников произошли в больнице (данные не представлены в таблице 1).
3.2. Визуализация сетей и метрики центральности для данных MERS
Контактная структура обращений MERS в KSA в период с июня 2012 г.
по сентябрь 2016 г. показана на рисунке 4. Изолированные узлы ((80,7%)) с нулевой степенью не показаны на рисунке. . Было зарегистрировано 1113 отдельных случаев, в то время как количество зарегистрированных контактов на одного пациента с MERS составляет от 1 () до 17 (), со средним значением 0.27 (SD = 0,76). Всего было 266 подключений — 110 первичных и 156 вторичных. Большинство вторичных дел первой линии не привело к возникновению собственных вторичных дел. Самый большой кластер имеет конфигурацию «колесо-спица», в которой номер пациента 1664 находится в центре и связан с 17 другими вторичными случаями (6,4% от общего числа случаев в сети) (рис. 4). Результаты показали, что большинство вспышек произошло в больнице (обозначено темной линией на Рисунке 4) и что большинство инфицированных пациентов были работниками, не оказывающими медицинской помощи, с сопутствующими заболеваниями (обозначены зелеными узлами на Рисунке 4).
В Таблице 2 представлены меры оценки централизации сети для 10 наиболее важных узлов (впоследствии называемых пациентами), выбранных по каждой метрике сети.
На основе этих сетевых показателей был выбран 31 узел, достойный приоритезации (таблица 2). Выявлено, что 9 из 31 (29%) случаев — медицинские работники и 8 (25,8%) случаев имели ту или иную сопутствующую патологию. Около половины приоритетных узлов ((48,4%)) произошли в больничных условиях, а 7 (22,6%) случаев закончились смертельным исходом.
На основе показателей степени центральности пять наиболее важных дел были определены на основе по крайней мере пяти вторичных дел, что указывает на большое количество связанных контактов, заслуживающих определения приоритета (таблица 2). Количество вторичных случаев в каждом SSE незначительно варьируется (от 5 до 17). Сетевые показатели близости и 2-охвата поместили одних и тех же пациентов (1664, 1672, 1673, 1674, 1681, 1682, 1683, 1684, 1685 и 1686) в топ-10 случаев, заслуживающих определения приоритета, в то время как список показателей собственных векторов также был очень похож. .Баллы промежуточности, которые указывают на количество других узлов, инфицированных данным узлом, показали, что пациенты 1522, 1521, 897, 895 и 910 имели наивысшую пятерку наивысших баллов промежуточности в диапазоне от 6 до 9.
Среди важных 4 случая в зависимости от степени центральности закончились летальным исходом. Пациент 1664 был выбран (на основании показателей степени, близости, промежуточности и центральности сети собственных векторов) как наиболее важный в сети передачи из-за наибольшего количества вторичных случаев.Тем не менее, случаи, отобранные с использованием промежуточной центральности, немного отличались от других показателей, и во главе списка стоял пациент 1522. Оценки центральности степени и промежуточности показаны на рисунках 5 (a) и 5 (b), соответственно. Чем больше площадь узла, тем выше уровень приоритета.
3.3. Атрибуты пациентов и центральность сети
Когда показатели централизации сети использовались для исследования связи между атрибутами пациента и положением пациента в сети, только центральность собственного вектора была значимо связана с двумя атрибутами пациента.Центральность собственного вектора была в значительной степени () связана с местом воздействия, при этом госпитальная инфекция имела в среднем значительно более высокую центральность собственного вектора, чем другие места воздействия.
Точно так же работа медицинского работника была в значительной степени связана () с центральностью собственного вектора. Чтобы ответить на вопросы о взаимосвязях между метриками центральности сети, результаты показывают, что центральность степени пациента объясняет 90,2% вариации центральности близости пациента, в то время как 14% и 9%.3% вариации центральности по близости объясняются центральностью по собственному вектору и центральностью по промежуточности, соответственно.
Кроме того, мы исследовали, имеют ли сверхраспространяющиеся пациенты с высокими показателями сетевой центральности (например, степень, промежуточность, близость, собственный вектор и 2-охват) схожие атрибуты. Существенные различия наблюдались по возрасту, полу, количеству медицинских работников и летальным исходам по регионам; однако различий в доле пациентов с сопутствующими заболеваниями не наблюдалось.
4. Обсуждение
В этом исследовании несколько показателей централизации сети (степень, промежуточность, близость, собственный вектор и 2-охват) использовались для количественной оценки связи между случаями MERS и определения того, какой пациент требует приоритетного вмешательства.
Обычно пациент с наивысшей степенью имеет больше всего связей с другими пациентами в сети [9]. Сообщается, что Саудовская Аравия постоянно сталкивается с риском вспышек MERS [26]. Полученные данные подчеркивают важность характеристик пациента для понимания уровня их заразности.Результаты показывают, что медицинские учреждения и медицинские работники являются наиболее важными факторами в развитии национальных эпидемий MERS. Хотя медицинские работники подвергаются более высокому риску заражения MERS из-за их близости к инфицированным пациентам, предыдущие исследования показали, что случаи заболевания среди медицинских работников менее серьезные [27] с небольшим количеством смертельных исходов [28, 29].
Больничные инфекции демонстрируют более высокую взаимосвязь и, в среднем, связаны с пациентами, которые в большей степени связаны с пациентами с высокой степенью связи, чем с внебольничными инфекциями.Недавние исследования сообщили о вспышках MERS в больницах [5, 30–33]. Переполненность больниц из-за легкого доступа к медицинской помощи заставила MERS быстро распространиться по Корее [5].
Практически все случаи MERS в Корее произошли при передаче от больницы к больнице [5].
Точно так же медицинские работники больше связаны с важными узлами, чем другие работники. Высокая степень связи между медицинскими работниками и их близость к случаям MERS неудивительны с учетом характера их работы.В целом медицинские работники Саудовской Аравии негативно относятся к инфекции MERS [34, 35]. Хотя в некоторых больницах были разработаны эпидемиологические планы по инфекционным заболеваниям, вспышки MERS все еще происходили из-за несоблюдения мер инфекционного контроля [33]. Большая часть медицинских работников чувствовала риск заражения этой болезнью, но была вынуждена оказывать помощь пациентам с MERS [33, 34]. Точно так же высокий процент медицинских работников не чувствует себя в безопасности на работе, используя стандартные меры предосторожности [34].
С точки зрения количества подключенных контактов (по степени централизации) узлы 1664, 1025, 124, 133 и 897 были в пятерке самых активных случаев MERS, но они не отражают разброс MERS.
Наиболее влиятельным узлом является пациент 1664 в зависимости от степени центральности. Большинство вторичных случаев, связанных с пациентом 1664, либо лечились одним и тем же медицинским работником (-ами), либо сами являются медицинскими работниками, которые обслуживали пациента 1664. Пациенты, которые сильно связаны в сети, с большей вероятностью будут похожи друг на друга, чем другой.Пациентка 1664 была 47-летней женщиной, поступившей в больницу с несвязанными симптомами [36], и она была связана с 14 случаями медицинских работников и 3 случаями в семье, потому что многие медицинские работники лечили ее на начальном этапе во время госпитализации по поводу сосудистого заболевания. хирургическое отделение и первоначально в палате открытого типа, подчеркивая важность ограничения доступа для других пациентов и карантина.
Что касается инфекционности, то при определении силы пациента в сети не только по его связности, но и по взаимосвязанности его вторичных случаев, показатель промежуточности обеспечивает лучшую оценку.
Низкий показатель промежуточности пациента 1664 указывает на то, что, хотя пациент 1664 связывает многих других пациентов, это не путь к дальнейшей инфекции. Узлы 1522, 1521, 897, 895 и 910 были определены как критические для распространения MERS на другие случаи с использованием метрики промежуточности. Эти пациенты действовали как мост, соединяющий другие более мелкие вторичные случаи и, таким образом, способствуя распространению инфекции MERS, связываясь с другими вторичными случаями, которые также связывают другие важные случаи. Было обнаружено, что люди, которые связывают 2 или более отдельных контакта, имеют повышенную вероятность подключения к нескольким контактам [37].Пациент 1522, женщина 26 лет без сопутствующих заболеваний, был связан с тремя вторичными случаями и пятью другими непрямыми потомками.
Основное ограничение в этом исследовании заключается в источниках данных и точности отслеживания контактов. Анализ основан на ретроспективных данных, а не на перспективных данных, собранных из нескольких общедоступных источников.
Точность некоторой информации, предоставленной пациентом, может быть недоступна для проверки, особенно во время ранних вспышек; однако с годами отчетность была улучшена благодаря координации между Министерством здравоохранения Саудовской Аравии и региональным офисом ВОЗ.Точно так же, хотя признается, что большинство зарегистрированных кластеров произошло в больнице в результате отслеживания контактов, это неудивительно, поскольку в больнице проводится надлежащий мониторинг и сбор данных, которые выявляют крупные вторичные случаи в медицинских учреждениях. Наконец, как и в случае общедоступных данных, эти данные исследований характеризуются отсутствием данных. Хотя проблемы, связанные с основанными на выводах общедоступными эпидемиологическими данными, признаются, результаты значимы и позволяют предположить, что структура и характеристики контактной сети действительно могут иметь значительное влияние на скорость передачи болезни MERS.
5. Выводы
Настоящее исследование подчеркнуло важность контактной сети в распространении инфекционных заболеваний.
Эти результаты дают интересные выводы. Они показывают, что сетевой анализ в режиме реального времени может дать представление о структуре передачи инфекционности для выявления важных игроков для изоляции и выборочного лечения. Более того, результаты представляют собой рациональную оценку размера вспышки и основных структурных характеристик группы [37].Пациенты с высокой степенью централизации играют важную роль в ослаблении эпидемии. Пациенты с высокой степенью централизации сыграли важную роль в качестве ослабителей эпидемии, поскольку они связаны со многими вторичными случаями, которые не привели к возникновению собственных вторичных случаев. В то время как пациенты с высокой степенью заболеваемости являются усилителями эпидемии, они являются путем заражения других пациентов. Это исследование показало, что наиболее важные узлы находятся в больнице, и медицинские работники более подвержены инфекции.Патогенные капли легко передаются в закрытых помещениях больниц, и меры контроля следует предпринимать на разных уровнях больниц.
Уменьшение числа контактов, особенно внутри больницы, за счет ограничения посещения больницы семьями пациентов с MERS и сокращения числа медицинских работников, имеющих доступ к пациентам с MERS, безусловно, окажет значительное влияние на распространение болезни MERS. Сообщается, что Саудовская Аравия постоянно сталкивается с риском вспышек MERS [26]. Если не будут приняты меры контроля, чтобы сократить количество посетителей больниц и перемещений несущественного персонала в медицинском учреждении, с их связью с людьми в сообществе, болезнь ускорит дальнейшие национальные / международные вспышки.Дальнейшие исследования должны быть сосредоточены на эпидемиологическом анализе, изучающем роль медицинского учреждения в распространении болезни MERS.
Конфликт интересов
Авторы заявляют об отсутствии конфликта интересов.
Благодарности
Это исследование было поддержано исследовательским грантом QUST-CAS-SPR-2017-25 Катарского университета. Авторы также хотели бы поблагодарить Majeed Adegboye за его помощь в управлении данными MERS.
Систематический обзор серологической распространенности БВРС-КоВ (ближневосточного респираторного синдрома, коронавируса) и распространенности вирусной РНК у верблюдов-дромадеров: последствия для вакцинации животных
% PDF-1.4 % 73 0 объект > эндобдж 96 0 объект > поток application / pdf
5dc400uuid: 79f302e5- 1dd2-11b2-0a00-810000000000 конечный поток эндобдж 1 0 объект > эндобдж 2 0 obj > / MediaBox [0 0 595.29999 841.
] / Parent 1 0 R / Resources> / ProcSet [/ PDF / Text] >> / Type / Page >> эндобдж 3 0 obj > / MediaBox [0 0 595.29999 841.
] / Parent 1 0 R / Resources> / ProcSet [/ PDF / Text] >> / Type / Page >>
эндобдж
4 0 obj
> / MediaBox [0 0 595.
29999 841.
] / Parent 1 0 R / Resources> / ProcSet [/ PDF / Text] >> / Type / Page >> эндобдж 5 0 obj > / MediaBox [0 0 595.29999 841.
] / Parent 1 0 R / Resources> / ProcSet [/ PDF / Text] >> / Type / Page >> эндобдж 6 0 obj > / MediaBox [0 0 595.29999 841.
] / Parent 1 0 R / Resources> / ProcSet [/ PDF / Text] >> / Type / Page >> эндобдж 7 0 объект > / MediaBox [0 0 595.29999 841.
] / Parent 1 0 R / Resources> / ProcSet [/ PDF / Text] >> / Type / Page >> эндобдж 8 0 объект > / MediaBox [0 0 595.29999 841.
] / Parent 1 0 R / Resources> / ProcSet [/ PDF / Text] >> / Type / Page >> эндобдж 9 0 объект > / MediaBox [0 0 595.29999 841.
] / Parent 1 0 R / Resources> / ProcSet [/ PDF / Text] >> / Type / Page >> эндобдж 10 0 obj > / MediaBox [0 0 595.29999 841.
] / Parent 1 0 R / Resources> / ProcSet [/ PDF / Text] >> / Type / Page >> эндобдж 11 0 объект > / MediaBox [0 0 595.29999 841.
] / Parent 1 0 R / Resources> / ProcSet [/ PDF / Text] >> / Type / Page >>
эндобдж
12 0 объект
> / MediaBox [0 0 595.
29999 841.
] / Parent 1 0 R / Resources> / ProcSet [/ PDF / Text] >> / Type / Page >> эндобдж 13 0 объект > / MediaBox [0 0 595.29999 841.
] / Parent 1 0 R / Resources> / ProcSet [/ PDF / Text] >> / Type / Page >> эндобдж 14 0 объект > / MediaBox [0 0 595.29999 841.
] / Parent 1 0 R / Resources> / ProcSet [/ PDF / Text] >> / Type / Page >> эндобдж 15 0 объект > / MediaBox [0 0 595.29999 841.
] / Parent 1 0 R / Resources> / ProcSet [/ PDF / Text] >> / Type / Page >> эндобдж 16 0 объект > / MediaBox [0 0 595.29999 841.
] / Parent 1 0 R / Resources> / ProcSet [/ PDF / Text] >> / Type / Page >> эндобдж 17 0 объект > / MediaBox [0 0 595.29999 841.
] / Parent 1 0 R / Resources> / ProcSet [/ PDF / Text] >> / Type / Page >> эндобдж 18 0 объект > / MediaBox [0 0 595.29999 841.
] / Parent 1 0 R / Resources> / ProcSet [/ PDF / Text] >> / Type / Page >> эндобдж 19 0 объект > / MediaBox [0 0 595.29999 841.
] / Parent 1 0 R / Resources> / ProcSet [/ PDF / Text] >> / Type / Page >>
эндобдж
20 0 объект
> / MediaBox [0 0 595.
29999 841.
] / Parent 1 0 R / Resources> / ProcSet [/ PDF / Text] >> / Type / Page >> эндобдж 21 0 объект > / MediaBox [0 0 595.29999 841.
] / Parent 1 0 R / Resources> / ProcSet [/ PDF / Text] >> / Type / Page >> эндобдж 22 0 объект > / MediaBox [0 0 595.29999 841.
] / Parent 1 0 R / Resources> / ProcSet [/ PDF / Text] >> / Type / Page >> эндобдж 23 0 объект > / MediaBox [0 0 595.29999 841.
] / Parent 1 0 R / Resources> / ProcSet [/ PDF / Text] >> / Type / Page >> эндобдж 24 0 объект > / MediaBox [0 0 595.29999 841.
] / Parent 1 0 R / Resources> / ProcSet [/ PDF / Text] >> / Type / Page >> эндобдж 25 0 объект > / MediaBox [0 0 595.29999 841.
] / Parent 1 0 R / Resources> / ProcSet [/ PDF / Text] >> / Type / Page >> эндобдж 26 0 объект > / MediaBox [0 0 595.29999 841.
] / Parent 1 0 R / Resources> / ProcSet [/ PDF / Text] >> / Type / Page >> эндобдж 27 0 объект > / MediaBox [0 0 595.29999 841.
] / Parent 1 0 R / Resources> / ProcSet [/ PDF / Text] >> / Type / Page >> эндобдж 28 0 объект > / ProcSet [/ PDF / Text / ImageC] / XObject >>> / Type / Page >> эндобдж 29 0 объект > / ProcSet [/ PDF / Text / ImageC] / XObject >>> / Type / Page >> эндобдж 30 0 объект > / ProcSet [/ PDF / Text / ImageC] / XObject >>> / Type / Page >> эндобдж 31 0 объект > / ProcSet [/ PDF / Text / ImageC] / XObject >>> / Type / Page >> эндобдж 161 0 объект [163 0 R 164 0 R] эндобдж 162 0 объект > поток Hd; O0wK | D_ ށ Ё2 [qp ܖ ~ {ig? U, X x =, S
Коронавирусные инфекции у детей: от SARS и MERS до COVID-19, обзор эпидемиологических и клинических особенностей
Ключевые слова
Коронавирус, Ближневосточный респираторный синдром (MERS), Тяжелый острый респираторный синдром (SARS), COVID-19, дети, клинические проявления.
Ссылки
1. Лай М.М. Коронавирус: организация, репликация и экспрессия генома. Annu Rev Microbiol. 1990; 44: 303-333. DOI: 10.1146 / annurev.mi.44.100190.001511
2. Мастерс П.С., Перлман С. Coronaviridae. В: Fields Virology, 6-е изд., Knipe DM, Howley PM, Cohen JI, et al (Eds), Lippincott Williams & Wilkins, a Wolters Kluwer business, Philadelphia 2013.Том 2, с.825
3. Woo PC, Huang Y, Lau SK, Yuen KY. Геномика и биоинформатический анализ коронавируса. Вирусы. 2010; 2 (8): 1804-1820. DOI: 10.3390 / v2081803
4. Н. Джеймс Маклахлан Эдвард Дж Дубови. В: Ветеринарная вирусология Феннера, 5-е изд (2017), глава 24, стр. 435
5. Су С., Вонг Дж., Ши В. и др. Эпидемиология, генетическая рекомбинация и патогенез коронавирусов. Trends Microbiol. 2016; 24 (6): 490-502. DOI: 10.1016 / j.tim.2016.03.003
6. Всемирная организация здравоохранения.Краткое изложение вероятных случаев SARS с началом заболевания с 1 ноября 2002 г. по 31 июля 2003 г.
Доступно по адресу http://www.who.int/csr/sars/country/table20030923/en/print.html; последний доступ 30 марта 2020
7. Всемирная организация здравоохранения. Группа по наблюдению за тяжелым острым респираторным синдромом. Личное общение
8. Чан В.М., Кван Ю.В., Ван Х.С., Люн К.В., Чиу М.С. Эпидемиологическая связь и последствия для общественного здравоохранения кластера тяжелого острого респираторного синдрома в большой семье.Pediatr Infect Dis J. 2004; 23 (12): 1156-1159.
9. Хуэй Д.С., Сун Дж.Дж. Острое респираторное заболевание. Грудь. 2003; 124 (1): 12-15. DOI: 10.1378 / сундук.124.1.12
10. Чан Ч.В., Чиу В.К., Чан С.Ч., Чоу Е.Ю., Чунг Х.М., ИП ПЛ. Остеонекроз у детей с тяжелым острым респираторным синдромом. Pediatr Infect Dis J. 2004; 23 (9): 888-890. DOI: 10.1097 / 01.inf.0000137570.37856.ea
11. Чиу В.К., Чунг П.С., Нг К.Л. и др. Тяжелый острый респираторный синдром у детей: опыт в региональной больнице Гонконга.Pediatr Crit Care Med. 2003; 4 (3): 279-283.
DOI: 10.1097 / 01.PCC.0000077079.42302.81
12. Леунг Ч.В., Кван Ю.В., Ко П.В. и др. Тяжелый острый респираторный синдром у детей. Педиатрия. 2004; 113 (6): e535 ‐ e543. DOI: 10.1542 / педс.113.6.e535
13. Ng PC, Lam CW, Li AM, et al. Воспалительный цитокиновый профиль у детей с тяжелым острым респираторным синдромом. Педиатрия. 2004; 113 (1, часть 1): e7 ‐ e14. DOI: 10.1542 / peds.113.1.e7
14. Леунг Ч.В., Чиу В.К. Клиника, диагностика, лечение и исходы тяжелого острого респираторного синдрома (ОРВИ) у детей.Педиатр Респир Ред. 2004; 5 (4): 275-288. DOI: 10.1016 / j.prrv.2004.07.010
15. Битнун А., Аллен У., Хертер Х. и др. Дети госпитализированы с тяжелым острым респираторным синдромом в Торонто. Педиатрия. 2003; 112 (4): e261. DOI: 10.1542 / педс.112.4.e261
16. Ли Г., Чен Х, Сюй А. Профиль специфических антител к коронавирусу, ассоциированному с SARS. N Engl J Med. 2003; 349 (5): 508-509. DOI: 10.1056 / NEJM2003073134
17. Цоу И.Ю., Ло ЛЭ, Кау Г.
Дж., Чан И., Чи Т.С. Тяжелый острый респираторный синдром (SARS) в педиатрическом кластере Сингапура.Pediatr Radiol. 2004; 34 (1): 43-46. DOI: 10.1007 / s00247-003-1042-2
18. Леунг Ч.В., Ли СК. Временное руководство PMH / PWH по ведению детей с SARS. HK J Paediatr 2003; 8: 168-9
19. Заки AM, ван Бохемен S, Bestebroer TM, Osterhaus AD, Fouchier RA. Изоляция нового коронавируса от мужчины с пневмонией в Саудовской Аравии [опубликованное исправление опубликовано в N Engl J Med. 25 июля 2013 г .; 369 (4): 394]. N Engl J Med. 2012; 367 (19): 1814-1820. DOI: 10.1056 / NEJMoa1211721
20.Всемирная организация здравоохранения. Коронавирус ближневосточного респираторного синдрома (БВРС-КоВ) — Королевство Саудовская Аравия. Доступно по адресу: https://www.who.int/csr/don/24-feb February-2020-mers-saudi-arabia/en/; последний доступ 4 марта 2020
21. Зумла А., Хуэй Д.С., Перлман С. Ближневосточный респираторный синдром. Ланцет. 2015; 386 (9997): 995‐1007. DOI: 10.1016 / S0140-6736 (15) 60454-8
22.
Бартенфельд М., Гриез С., Уеки Т., Гербер С.И., Пикок Г. Ближневосточный респираторный синдром, коронавирус и дети. Клиника Педиатр (Phila).2017; 56 (2): 187-189. DOI: 10.1177 / 0009922816678820
23. Мемиш З.А., Ат-Тауфик Дж.А., штаб-квартира Махдума и др. Скрининг на коронавирусную инфекцию ближневосточного респираторного синдрома у пациентов больниц, их медицинских работников и членов семьи: проспективное описательное исследование. Clin Microbiol Infect. 2014; 20 (5): 469-474. DOI: 10.1111 / 1469-0691.12562
24. Хури-Булос Н., Пейн Д.К., Лу X и др. Коронавирус ближневосточного респираторного синдрома не обнаружен у детей, госпитализированных с острым респираторным заболеванием в Аммане, Иордания, с марта 2010 года по сентябрь 2012 года.Clin Microbiol Infect. 2014; 20 (7): 678-682. DOI: 10.1111 / 1469-0691.12438
25. Мемиш З.А., Ат-Тауфик Дж. А., Ассири А. и др. Ближневосточный респираторный синдром, коронавирусное заболевание у детей. Pediatr Infect Dis J. 2014; 33 (9): 904-906.
DOI: 10.1097 / INF.0000000000000325
26. Табет Ф., Чехаб М., Бафаких Х., Аль-Мохаймид С. Коронавирус ближневосточного респираторного синдрома у детей. Саудовская медицина, 2015; 36 (4): 484-486. DOI: 10.15537 / smj.2015.4.10243
27. Ассири А., Аль-Тауфик Дж.А., Аль-Рабиах А.А. и др.Эпидемиологические, демографические и клинические характеристики 47 случаев заболевания коронавирусом ближневосточного респираторного синдрома из Саудовской Аравии: описательное исследование. Lancet Infect Dis. 2013; 13 (9): 752-761. DOI: 10.1016 / S1473-3099 (13) 70204-4
28. Всемирная организация здравоохранения. Коронавирус ближневосточного респираторного синдрома: определение случая для сообщения в ВОЗ. Доступно по адресу: https://www.who.int/csr/disease/coronavirus_infections/case_definition/en/; последний доступ 4 марта 2020
29. Всемирная организация здравоохранения.Заявление ВОЗ относительно кластера случаев пневмонии в Ухане, Китай. Доступно по адресу: https://www.who.int/china/news/detail/09-01-2020-who-statement; последний доступ 4 марта 2020
30.
Чжу Н., Чжан Д., Ван В. и др. Новый коронавирус от пациентов с пневмонией в Китае, 2019. N Engl J Med. 2020; 382 (8): 727-733. DOI: 10.1056 / NEJMoa2001017
31. Всемирная организация здравоохранения. Вспышка коронавирусной болезни (COVID-19). Доступно по адресу: https://www.who.int/emergencies/diseases/novel-coronavirus-2019; последний доступ 4 марта 2020
32.Всемирная организация здравоохранения. Виртуальная пресс-конференция ВОЗ по COVID-19. 11 марта 2020 г. Доступно по адресу: https://www.who.int/docs/defaultsource/coronaviruse/transcripts/who-audio-emergencies-coronavirus-press-conference-full-and-final11mar2020.pdf?sfvrsn=cb432bb3_2; последний доступ 16 марта 2020
33. Zhou P, Yang XL, Wang XG, et al. Вспышка пневмонии, связанная с новым коронавирусом, вероятно, происхождения летучих мышей. Природа. 2020; 579 (7798): 270-273. DOI: 10.1038 / s41586-020-2012-7
34. Лу Р, Чжао X, Ли Дж. И др.Геномная характеристика и эпидемиология нового коронавируса 2019 г .: влияние на происхождение вируса и связывание с рецептором.
Ланцет. 2020; 395 (10224): 565-574. DOI: 10.1016 / S0140-6736 (20) 30251-8
35. Ren LL, Wang YM, Wu ZQ, et al. Идентификация нового коронавируса, вызывающего тяжелую пневмонию у человека: описательное исследование. Чин Мед Дж (англ.). 2020; 133 (9): 1015-1024. DOI: 10.1097 / CM9.0000000000000722
36. Guo Q, Li M, Wang C, Wang P, Fang Z, Tan J, Wu S, Xiao Y, Zhu H. Host и прогнозирование инфекционности нового коронавируса Ухань 2019 с использованием алгоритма глубокого обучения.bioRxiv 2020
37. Ji W, Wang W, Zhao X, Zai J, Li X. Гомологичная рекомбинация в спайковом гликопротеине недавно идентифицированного коронавируса может усилить межвидовую передачу от змеи к человеку. J Med Virol 2020; 92, 433–440
38. Xiao KP, Zhai JP Feng YY, et al. Выделение и характеристика 2019-nCoV-подобного коронавируса от малайских ящеров. bioRxiv 2020.02.17.951335
39. Лам Т., Шум М., Чжу Х.З. и др. Идентификация коронавирусов, связанных с 2019-nCoV, у малайских панголинов на юге Китая.
bioRxiv 2020.02.13.945485
40. Лу Р, Чжао X, Ли Дж. И др. Геномная характеристика и эпидемиология нового коронавируса 2019 г .: влияние на происхождение вируса и связывание с рецептором. Ланцет. 2020; 395 (10224): 565-574. DOI: 10.1016 / S0140-6736 (20) 30251-8
41. Лу Г, Ван Ц., Гао ГФ. От летучей мыши к человеку: особенности всплеска, определяющие «прыжок через хозяина» коронавирусов SARS-CoV, MERS-CoV и других. Trends Microbiol. 2015; 23 (8): 468-478. DOI: 10.1016 / j.tim.2015.06.003
42. Ду Л, Хе И, Чжоу И, Лю С., Чжэн Б.Дж., Цзян С.Спайковый белок SARS-CoV — мишень для разработки вакцин и терапевтических средств. Nat Rev Microbiol. 2009; 7 (3): 226-236. DOI: 10.1038 / nrmicro2090
43. Du L, Yang Y, Zhou Y, Lu L, Li F, Jiang S. Спайковый белок БВРС-КоВ: ключевая мишень для противовирусных препаратов. Эксперт считает, что цели. 2017; 21 (2): 131-143. DOI: 10.1080 / 14728222.2017.1271415
44. Hoffmann M, Kleine-Weber H, Schroeder S, et al. Вхождение клеток SARS-CoV-2 зависит от ACE2 и TMPRSS2 и блокируется клинически подтвержденным ингибитором протеазы.
Клетка. 2020; 181 (2): 271-280.e8. DOI: 10.1016 / j.cell.2020.02.052
45. Wang Q, Zhang Y, Wu L, et al. Структурные и функциональные основы проникновения SARS-CoV-2 с использованием человеческого ACE2. Клетка. 2020; 181 (4): 894-904.e9. DOI: 10.1016 / j.cell.2020.03.045
46. Xia S, Zhu Y, Liu M, et al. Механизм слияния 2019-nCoV и ингибиторов слияния, нацеленных на домен HR1 в спайковом белке [опубликовано в Интернете перед печатью, 11 февраля 2020 г.]. Cell Mol Immunol. 2020; 1‐3. DOI: 10.1038 / s41423-020-0374-2
47. Chan JF, Yuan S, Kok KH, et al.Семейный кластер пневмонии, связанный с новым коронавирусом 2019 года, указывающий на передачу от человека к человеку: исследование семейного кластера. Ланцет. 2020; 395 (10223): 514-523. DOI: 10.1016 / S0140-6736 (20) 30154-9
48. Дитц К. Оценка основного репродуктивного числа инфекционных болезней. Stat Methods Med Res. 1993; 2 (1): 23-41. DOI: 10.1177 / 096228029300200103
49. Риденхур Б., Ковалик Дж. М., Шай Д.
К.. Unraveling R0: соображения для приложений общественного здравоохранения. Am J Public Health.2014; 104 (2): e32 ‐ e41. DOI: 10.2105 / AJPH.2013.301704
50. Всемирная организация здравоохранения. Отчет о ситуации с коронавирусной инфекцией 2019 г. (COVID-19)-46, 7 марта 2020 г. Доступно по адресу: https://www.who.int/docs/default-source/coronaviruse/situation-reports/20200306-sitrep-46-covid- 19.pdf? Sfvrsn = 96b04adf_4; последний доступ 16 марта 2020
51. Лай А., Бергна А., Акчарри К., Галли М., Цехендер Г. Ранняя филогенетическая оценка эффективного числа репродукций SARS-CoV-2 [опубликовано в Интернете перед печатью, 25 февраля 2020 г.].J Med Virol. 2020; 10.1002 / jmv.25723. DOI: 10.1002 / jmv.25723
52. Лю Й., Гейл А.А., Уайлдер-Смит А., Роклов Дж. Репродуктивное число COVID-19 выше по сравнению с коронавирусом SARS. J Travel Med. 2020; 27 (2): taaa021. DOI: 10.1093 / jtm / taaa021
53. Хэмминг И., Тименс В., Бултуис М.Л., Лели А.Т., Навис Дж., Ван Гур Х.
Распределение в тканях белка ACE2, функционального рецептора коронавируса SARS. Первый шаг к пониманию патогенеза SARS. J Pathol. 2004; 203 (2): 631-637. DOI: 10.1002 / путь.1570
54. Zou X, Chen K, Zou J, Han P, Hao J, Han Z. Анализ данных одноклеточной РНК-seq по экспрессии рецептора ACE2 показывает потенциальный риск различных органов человека, уязвимых к инфекции 2019-nCoV. Front Med. 2020; 14 (2): 185‐192. DOI: 10.1007 / s11684-020-0754-0
55. Zhang H, Kang Z, Gong H, Xu D, Wang J, Li Z, et al. Пищеварительная система — это потенциальный путь заражения 2019-nCov: биоинформатический анализ, основанный на одноклеточных транскриптомах. Препринт на https: // www.biorxiv.org/content/10.1101/2020.01.30.927806v1 (2020)
56. Чай Х, Ху Л., Чжан И, Хан В., Лу З., Ке А. и др. Специфическая экспрессия ACE2 в холангиоцитах может вызывать повреждение печени после инфекции 2019-nCoV. Препринт на https://www.biorxiv.org/content/10.1101/2020.02.03.931766v1 (2020)
57. Ли Пи, Сюэ ПР.
Новые угрозы со стороны зоонозных коронавирусов — от SARS и MERS до 2019-nCoV [опубликовано в Интернете перед печатью, 4 февраля 2020 г.]. J Microbiol Immunol Infect. 2020 ;. DOI: 10.1016 / j.jmii.2020.02.001
58. Li Q, Guan X, Wu P, et al. Динамика ранней передачи новой пневмонии, инфицированной коронавирусом, в Ухане, Китай. N Engl J Med. 2020; 382 (13): 1199-1207. DOI: 10.1056 / NEJMoa2001316
59. van Doremalen N, Bushmaker T, Morris DH, et al. Аэрозольная и поверхностная стабильность SARS-CoV-2 по сравнению с SARS-CoV-1. N Engl J Med. 2020; 382 (16): 1564-1567. DOI: 10.1056 / NEJMc2004973
60. Лу CW, Лю XF, Цзя ZF. Нельзя игнорировать передачу 2019-нКоВ через глазную поверхность.Ланцет. 2020; 395 (10224): e39. DOI: 10.1016 / S0140-6736 (20) 30313-5
61. Sun CB, Wang YY, Liu GH, Liu Z. Роль глаза в передаче человеческого коронавируса: что мы знаем и чего не знаем. Фронт общественного здравоохранения. 2020; 8: 155. Опубликовано 24 апреля 2020 г. doi: 10.3389 / fpubh.
2020.00155
62. Кампф Г., Тодт Д., Пфендер С., Штейнманн Э. Устойчивость коронавирусов на неодушевленных поверхностях и их инактивация биоцидными агентами. J Hosp Infect. 2020; 104 (3): 246-251. DOI: 10.1016 / j.jhin.2020.01.022
63. Guo ZD, Wang ZY, Zhang SF, et al. Аэрозольное и поверхностное распределение тяжелого острого респираторного синдрома Коронавирус 2 в больничных палатах, Ухань, Китай, 2020 г. [опубликовано в Интернете перед печатью, 10 апреля 2020 г.]. Emerg Infect Dis. 2020; 26 (7): 10.3201 / eid2607.200885. DOI: 10.3201 / eid2607.200885
64. Yeo C, Kaushal S, Yeo D. Кишечное поражение коронавирусов: возможна ли фекально-оральная передача SARS-CoV-2 ?. Ланцет Гастроэнтерол Гепатол. 2020; 5 (4): 335-337. DOI: 10.1016 / S2468-1253 (20) 30048-0
65.Chen Y, Chen L, Deng Q и др. Присутствие РНК SARS-CoV-2 в кале пациентов с COVID-19 [опубликовано в Интернете перед печатью, 3 апреля 2020 г.]. J Med Virol. 2020; 10.1002 / jmv.25825. DOI: 10.1002 / jmv.25825
66.
Holshue ML, DeBolt C., Lindquist S, et al. Первый случай нового коронавируса 2019 года в США. N Engl J Med. 2020; 382 (10): 929-936. DOI: 10.1056 / NEJMoa2001191
67. Cai J, Xu J, Lin D, et al. Серия случаев детей с новой коронавирусной инфекцией 2019 г .: клинические и эпидемиологические особенности [опубликовано в Интернете перед печатью, 28 февраля 2020 г.].Clin Infect Dis. 2020; ciaa198. DOI: 10.1093 / cid / ciaa198
68. Онг SWX, Тан Ю.К., Чиа П.Й. и др. Загрязнение воздуха, поверхности окружающей среды и средств индивидуальной защиты тяжелым острым респираторным синдромом Коронавирусом 2 (SARS-CoV-2) от пациента с симптомами [опубликовано в Интернете перед печатью, 4 марта 2020 г.]. ДЖАМА. 2020; 323 (16): 1610-1612. DOI: 10.1001 / jama.2020.3227
69. Istituto Superiore di Sanità. Эпидемия COVID-19. Aggiornamento nazionale. 20 maggio 2020 — руда 16.00. Доступно по адресу: https: // www.epicentro.iss.it/coronavirus/bollettino/bollettino-sorveglianza-integrata-covid-19_20-maggio-2020; последний доступ 24 мая 2020
70.
Ян П, Лю П, Ли Д., Чжао Д. Болезнь, вызванная вирусом короны, 2019, растущая угроза для детей ?. J Infect. 2020; 80 (6): 671-693. DOI: 10.1016 / j.jinf.2020.02.024
71. Li Q, Guan X, Wu P, et al. Динамика ранней передачи новой пневмонии, инфицированной коронавирусом, в Ухане, Китай. N Engl J Med. 2020; 382 (13): 1199-1207. DOI: 10.1056 / NEJMoa2001316
72. Dong Y, Mo XI, Hu Y, et al.Эпидемиологическая характеристика 2143 педиатрических пациентов с коронавирусной болезнью 2019 года в Китае. Педиатрия. 2020; 16:16. DOI: 10.1542 / педс.2020-0702
73. Lu X, Zhang L, Du H, et al. Инфекция SARS-CoV-2 у детей. N Engl J Med. 2020; 382 (17): 1663-1665. DOI: 10.1056 / NEJMc2005073
74. Лю В., Чжан К., Чен Дж. И др. Обнаружение Covid-19 у детей в начале января 2020 года в Ухане, Китай. N Engl J Med. 2020; 382 (14): 1370-1371. DOI: 10.1056 / NEJMc2003717
75. Zheng F, Liao C, Fan QH, et al.Клинические характеристики детей с коронавирусной болезнью 2019 г. в провинции Хубэй, Китай.
Curr Med Sci. 2020; 40 (2): 275-280. DOI: 10.1007 / s11596-020-2172-6
76. Цай Дж., Сюй Дж., Линь Д. и др. Серия случаев детей с новой коронавирусной инфекцией 2019 г .: клинические и эпидемиологические особенности [опубликовано в Интернете перед печатью, 28 февраля 2020 г.]. Clin Infect Dis. 2020; ciaa198. DOI: 10.1093 / cid / ciaa198
77. Xia W, Shao J, Guo Y, Peng X, Li Z, Hu D. Клинические и компьютерные особенности у педиатрических пациентов с инфекцией COVID-19: разные точки зрения у взрослых.Педиатр Пульмонол. 2020; 55 (5): 1169-1174. DOI: 10.1002 / ppul.24718
78. Рифаген С., Гомес Х, Гонсалес-Мартинес С., Уилкинсон Н., Теохарис П. Гипервоспалительный шок у детей во время пандемии COVID-19. Ланцет. 2020; 395 (10237): 1607-1608. DOI: 10.1016 / S0140-6736 (20) 31094-1
79. Ludvigsson JF. Систематический обзор COVID-19 у детей показывает более легкие случаи и лучший прогноз, чем у взрослых. Acta Paediatr. 2020; 109 (6): 1088-1095. DOI: 10.1111 / apa.15270
80. Центры по контролю и профилактике заболеваний.Коронавирусная болезнь 2019 у детей — США, 12 февраля — 2 апреля 2020 г. Доступно по адресу: https://www.cdc.gov/mmwr/volumes/69/wr/mm6914e4.htm#F2_down; последний доступ 24 мая 2020
81. Dong Y, Mo X, Hu Y, et al. Эпидемиология COVID-19 среди детей в Китае [опубликовано в Интернете перед печатью, 16 марта 2020 г.]. Педиатрия. 2020; e20200702. DOI: 10.1542 / педс.2020-0702
82. Генри Б.М., Липпи Дж., Плебани М. Лабораторные отклонения у детей с новым коронавирусным заболеванием, 2019 г. [опубликовано в Интернете перед печатью, 16 марта 2020 г.].Clin Chem Lab Med. 2020; /j/cclm.ahead-of-print/cclm-2020-0272/cclm-2020-0272.xml. DOI: 10.1515 / cclm-2020-0272
83. Fang Y, Zhang H, Xie J, et al. Чувствительность КТ грудной клетки на COVID-19: сравнение с ОТ-ПЦР [опубликовано в Интернете перед печатью, 19 февраля 2020 г.]. Радиология. 2020; 2004 32. DOI: 10.1148 / radiol.2020200432
84. Li W, Cui H, Li K, Fang Y, Li S. Компьютерная томография грудной клетки у детей с респираторной инфекцией COVID-19. Pediatr Radiol. 2020; 50 (6): 796-799. DOI: 10.1007 / s00247-020-04656-7
85.Дуань Ю.Н., Чжу Ю.К., Тан Л.Л., Цинь Дж. Особенности компьютерной томографии новой коронавирусной пневмонии (COVID-19) у детей [опубликовано в Интернете перед печатью, 14 апреля 2020 г.]. Eur Radiol. 2020; 1-7. DOI: 10.1007 / s00330-020-06860-3
86. Циммерманн П., Кертис Н. Коронавирусные инфекции у детей, включая COVID-19: Обзор эпидемиологии, клинических характеристик, диагностики, лечения и вариантов профилактики у детей. Pediatr Infect Dis J. 2020; 39 (5): 355-368. DOI: 10.1097 / INF.0000000000002660
87. Hon KL, Leung CW, Cheng WT, et al.Клинические проявления и исходы тяжелого острого респираторного синдрома у детей. Ланцет. 2003; 361 (9370): 1701-1703. DOI: 10.1016 / s0140-6736 (03) 13364-8
88. Chen ZM, Fu JF, Shu Q, et al. Рекомендации по диагностике и лечению респираторной инфекции у детей, вызванной новым коронавирусом 2019 г. [опубликовано в Интернете перед печатью 5 февраля 2020 г.]. Мир J Pediatr. 2020; 1-7. DOI: 10.1007 / s12519-020-00345-5
89. Цоу И.Ю., Ло Л.Э, Кау Г.Дж., Чан И., Чи Т.С. Тяжелый острый респираторный синдром (SARS) в педиатрическом кластере Сингапура.Pediatr Radiol. 2004; 34 (1): 43-46. DOI: 10.1007 / s00247-003-1042-2
90. Chen ZM, Fu JF, Shu Q, et al. Рекомендации по диагностике и лечению респираторной инфекции у детей, вызванной новым коронавирусом 2019 г. [опубликовано в Интернете перед печатью 5 февраля 2020 г.]. Мир J Pediatr. 2020; 1-7. DOI: 10.1007 / s12519-020-00345-5
91. Джонс В.Г., Миллс М., Суарес Д. и др. COVID-19 и болезнь Кавасаки: новый вирус и новый случай [опубликовано в Интернете перед печатью, 7 апреля 2020 г.]. Hosp Pediatr. 2020 г .;2020-0123. DOI: 10.1542 / hpeds.2020-0123
92. Giamarellos-Bourboulis EJ, Netea MG, Rovina N, et al. Комплексная иммунная дисрегуляция у пациентов с COVID-19 с тяжелой дыхательной недостаточностью [опубликовано в Интернете перед печатью, 17 апреля 2020 г.]. Клеточный микроб-хозяин. 2020; S1931-3128 (20) 30236-5. DOI: 10.1016 / j.chom.2020.04.009
93. Zhou Y, Fu B, Zheng X, et al. Патогенные Т-клетки и воспалительные моноциты провоцируют воспалительный шторм у пациентов с тяжелым Covid-19. Natl Sci Rev 2020 13 марта. Doi: 10.1093 / nsr / nwaa041
Способствовали ли технологии жилищному буму? Свидетельства MERS Стефана Левеллена, Эмили Уильямс :: SSRN
57 стр. Размещено: 18 мар.2021 г.
Дата написания: 16 марта 2021 г.
Абстрактные
Мы исследуем влияние системы электронной регистрации ипотечных кредитов, или MERS, на объемы выдачи ипотечных кредитов и уровень обращений взыскания до Великой рецессии.MERS был введен в конце 1990-х годов и значительно сократил затраты и время, связанные с продажей вторичной ипотеки. Используя новые данные из реестра сделок Массачусетса, мы показываем, что внедрение MERS привело к расширению предложения ипотечных кредитов, которое в первую очередь было вызвано небанковскими кредиторами, предоставляющими ипотечные кредиты заемщикам с низкими доходами. Мы также обнаружили, что по этим ипотечным кредитам уровень потери права выкупа был выше. В нашей статье дается новое объяснение увеличения предложения кредитов, наблюдавшегося до финансового кризиса 2008 года, и непропорционального увеличения предложения, наблюдавшегося в регионах с низкими доходами.
Ключевые слова: Предложение кредитов, жилищный бум, финансовые инновации, финансовые технологии, ипотека, небанковские кредиторы
Классификация JEL: D22, D24, G21, G23, G51, L11, O3
Рекомендуемое цитирование: Предлагаемая ссылка
Левеллен, Стефан и Уильямс, Эмили, Способствовали ли технологии жилищному буму? Данные MERS (16 марта 2021 г.).Journal of Financial Economics (JFE), готовится к печати, доступно на SSRN: https://ssrn.com/abstract=3806188 .