Антигены системы Rh (C, E, c, e), Kell – фенотипирование
Исследование включает в себя определение наличия на исследуемых эритроцитах наиболее клинически значимых антигенов системы Rh (C, E, c, e) и Kell (K).
Синонимы русские
Анализ крови на фенотип, риск гемотрансфузионных осложнений, анализ крови на эритроцитарные антигены.
Синонимы английские
Antigens of Rh (C ,E, c, e) system, Kell – phenotyping.
Метод исследования
Реакция агглютинации.
Какой биоматериал можно использовать для исследования?
Венозную кровь.
Как правильно подготовиться к исследованию?
- Исключить из рациона жирную пищу в течение 24 часов до исследования.
- Не курить в течение 30 минут до исследования.
Общая информация об исследовании
На поверхности красных кровяных телец-эритроцитов находится более 250 антигенов, которые разделяются на 29 генетических систем.
Резус-фактор (Rh) – одна из систем групп крови, считается наиболее важной после самой известной системы — ABO. Основным антигеном системы Rh считается антиген —
C-антиген имеет приблизительную частоту встречаемости 68% в белой популяции,
Е и е антигены кодируются аллелями гена RHCE и являются кодоминантными. Во всех популяциях е встречается чаще, чем Е (примерно 30% белого населения имеют Е и 98% имеют е-антигены). Е имеет более сильные иммуногенные свойства, чем е. В редких случаях может быть наследование инактивированных или частично неактивных генов RHCE, которые не кодируют Е- и е
Система Kell также является одной из наиболее важных групп крови в транфузиологии и в акушерской практике. Антитела Kell считаются значительно иммуногенными. Система группы крови Kell содержит 35 антигенов, из которых K/k (KEL1/KEL2), Kpa/Kpb (KEL3/KEL4), Jsa/Jsb (KEL5/KEL6) являются наиболее важными.
Исследование системы Rh (С, Е, с, е) и Kell успешно проводится методами реакции с моноклональными антителами и гель-фильтрацией. В первом методе используются специальные моноклональные смеси, предназначенные только для прямого тестирования и не используются в антиглобулиновом тесте. Rh-типирование также выполняется с использованием гель-фильтрации. Антисыворотка распределяется равномерно по всем частицам гелем. Антиген-положительные эритроциты реагируют с антисывороткой, при этом агглютинины связываются и не могут высвободиться из геля при центрифугировании.
Когда назначается исследование?
- Обследования перед планирующимися гемотрансфузиями в целях снижения частоты трансфузионных реакций.
- Дополнительные обследования во время беременности в целях оценки статуса по системе Rh и Kell.
- Диагностика, оценка риска возникновения гемолитической болезни новорождённых и решение о своевременном адекватном лечении данной патологии.
- Обследование всех доноров крови в соответствии с приказом МЗ РФ № 183н от 02.04.2013 г. «Об утверждении правил клинического использования донорской крови и (или) ее компонентов».
Что означают результаты?
Референсные значения: «отрицательно» для всех компонентов исследования.
Система Rh имеет пять разновидностей антигенов: C, D, E, c, e. Наиболее иммуногенным является антиген D. Иммуногенность других антигенов системы «резус» существенно ниже и убывает в следующем ряду: с > Е > С > е. Фактор Kell (K) стоит на втором месте после фактора D в шкале трансфузионно опасных антигенов эритроцитов.
Наличие или отсутствие определенных белков на мембране эритроцитов (фенотип антигенов) преимущественно определяется наследованием от родителей и не меняется в течение жизни. Люди, у которых отсутствует какой-либо конкретный антиген, могут развивать иммунный ответ с образованием антител при попадании в организм эритроцитов, несущих этот антиген. Такая ситуация возможна при переливаниях донорской крови или при прохождении эритроцитов плода в кровь матери во время беременности. Клиническими следствиями появления таких «аллоантител» являются
|
r. h. k — Translation into Russian — examples English
These examples may contain rude words based on your search.
These examples may contain colloquial words based on your search.
Republic of): Mohammad R. H. K. Djabbari
Республика): Мохаммед Р. Х.К. ДжаббариSuggest an example
Other results
The Samoa alphabet consists of 14 letters, with another three letters (H, K, R) used in loan words.
Самоанский язык использует латинскую графику — 18 букв, из которых три (H, K, R) встречаются только в заимствованных словах.Tongues and lips bleed like a m-o-t-h-e-r-f-u-c-k-e-r.
India M. H. Ansari, T. P. Sreenivasan, S. K. Guha, Sujan R. Chinoy, Manimekalai Murugesan
Индия М.Х. Ансари, Т.П. Сринивасан, С.К. Гуха, Суджан Р. Чиной, Манимекалаи МуругесанH. K. van Tuinen, R. P. M. Luttikhuizen, Pieter Dorst, Luc Schilling
Х.К. ван Тёйнен, Р.П.М. Люттикхёйзен, Питер Дорст, Люк СхиллингIn 1997 it was elevated to species status: O. H. Garrido; K. C. Parkes; G. B. Reynard; A. Kirkconnell; R. Sutton (1997).
В 1997 году он был повышен до статуса вида: O. H. Garrido; K. C. Parkes; G. B. Reynard; A. Kirkconnell; R. Sutton (1997).The second letter denotes weight rating, with H and K being used for the regular cab, M for the High Cab, and P, Q, and R for the Wide Cab model.
Вторая буква обозначает: Н и К используются для стандартных моделей, М для моделей с высокой кабиной, и Р, Q и R для моделей с широкой кабиной.BELGIUM J. Maisin (Representative), P. Govaerts, R. Kirchmann, H. P. Leenhouts, P. H. M. Lohman, K. Sankaranarayanan, D. Smeesters, A. Wambersie
БЕЛЬГИЯ Ж. Мезен (представитель), П. Говартц, Р. Киршманн, Х.П. Леенхаутс, П.Х.М. Лохман, К. Санкаранарайанан, Д. Смеестерс, А. ВамберсиТехнические характеристики — Перфоратор KOLNER KRH 1100C, 1100 Вт
Страна производства
Китай
Наличие кейса
есть
Сила удара, Дж
5. 5
Режимы работы
Тип патрона
SDS Plus
Тип хвостовика
SDS-Plus
Габариты, мм
340х235х80
Родина бренда
Германия
Max диаметр сверления буром (бетон)
30
Количество режимов работы
Плавный пуск
нет
Расположение двигателя
Регулировка частоты вращения
есть
Частота вращения шпинделя, об/мин
980
Гарантия
12 месяцев
Наличие подсветки
нет
Напряжение сети, В
220
Длина кабеля, м
2
Кол-во ударов в минуту, уд/мин
4300
Мах диаметр сверления (дерево), мм
43
Мах диаметр сверления (сталь), мм
13
Предохранительная муфта
есть
Сверлильный патрон
нет
Частота ударов, уд/мин
4300
Перфоратор электрический «Kolner KRH 520H» ЛУЧШАЯ ЦЕНА!!!
Код товара: 114145
В наличии до 30 шт.
|
||||||||||||||||||||||||||||||
Перфоратор Kolner KRH 520 H поддерживает два режима работы – сверление и ударное сверление. При максимальной мощности до 4700 ударов в минуту с энергией удара в 1.5 Дж перфоратор позволяет проделать в бетонном материале отверстие максимальным диаметром в 20 мм.
В комплекте с перфоратором Kolner KRH 520 H идут: угольные щетки, дополнительная рукоять, ограничитель бурения и ключевой патрон. Установленному патрону SDS-Plus не нужны дополнительные инструменты при смене насадок. Пусковая клавиша снабжена возможностью блокировки для комфортного использования инструмента при длительных работах.
|
||||||||||||||||||||||||||||||
Вес: 2.5 кг |
Клиника KRH-Medical — отзывы, фото, цены, телефон, адрес и как добраться — Медицинские центры — Москва
Клиника KRH-Medical (рейтинг на Zoon — 4) ведет свою деятельность согласно мировым стандартам качества медицинских услуг.
Учреждение функционирует как центр медицинских комиссий, медицинский центр, диагностический центр, медицинская лаборатория и стоматологическая клиника, где принимают врачи различных специальностей, в том числе онкологи, ортопеды и терапевты.
Для вас доступны услуги косметолога, процедурного кабинета и гирудотерапии, ряд медицинских манипуляций, в том числе отопластика, удаление бородавок, гименопластика, удаление новообразований и вестибулопластика, а также лечение эндометриоза, эрозии шейки матки и ячменя.
Отоларингологи, которые работают в учреждении, занимаются выполнением процедуры удаления серных пробок. При условии отсутствия осложнений это делается путем промывания слухового прохода, однако, если у пациента повреждена барабанная перепонка или налицо признаки воспалительного заболевания органов слуха, предпочитают инструментальные методы.
Если вам необходим мастер по реставрации зубов, в кабинете стоматологии вы найдете зубных врачей с соответствующим опытом. Самый быстрый и недорогой способ вернуть зубу эстетическую привлекательность — это установка специальной пломбы, которая при надлежащем исполнении практически неотличима внешне от зубной эмали. Однако в случае сильного разрушения может понадобиться изготовление винира, коронки из выбранного материала или даже удаление зуба с последующей имплантацией. Кроме того, здесь оказываются услуги эстетической и хирургической стоматологии, производится синуслифтинг, лечение кариеса, периодонтита и пульпита, зубопротезирование, чистка, отбеливание, базовое лечение, удаление зубов, а также удаление зубного камня.
Работает зубной техник.
Из диагностических процедур здесь предлагают лабораторную диагностику и УЗИ.
В стенах центра работают кабинеты общей, гинекологической, травматологической хирургии.
В отделении косметологии вы сможете заметно сократить мелкие морщинки с помощью мезонитей, поухаживать за своей кожей, сделать чистку лица, порелаксировать у мастера массажа, прочистить все поры процедурой пилинга, заняться коррекцией овала лица, пройти курс биоревитализации, побаловать свою кожу сеансом мезотерапии, скорректировать форму губ, убрать недостатки с помощью аппаратной косметологии, узнать побольше о лазерной коррекции.
Организация располагается у метро Жулебино, по адресу Московская область, Люберцы, Октябрьский проспект, 127. Сайт компании: krh-medical.ru. На ваши вопросы ответят по телефону: +7 (495) 252-88-98. Приемные часы — Ежедневно: 09:00 — 20:00.
медсестер KRH бастуют
Сотни медсестер Logan Health уволились с работы во вторник утром, что ознаменовало начало трехдневной забастовки в знак протеста против того, что они считают нежеланием больничной системы сдвинуться с места в соответствии с требованиями профсоюзов о повышении заработной платы и улучшении условий труда.
Забастовка началась со смены медсестер в 7 часов утра. Многие из бастующих медсестер провели утро и день, неся таблички и махая рукой движению по улице U.S. 93, недалеко от регионального медицинского центра Калиспелл. Вечером был запланирован митинг в парке Депо Калиспелла.
Медсестры вели переговоры о заключении контракта с тех пор, как они объединились в профсоюз SEIU Healthcare 1199NW, призывая к увеличению штатного расписания, восстановлению дежурной медсестры в каждом отделении, комитету по укомплектованию штатов медсестер и улучшению заработной платы и пособий.
«Мы хотим урегулировать этот вопрос», — сказала Морин Раш, дипломированная медсестра и член переговорной группы профсоюза, проработавшая в больнице 11 лет.«И мы не просим луну».
Раш сказал, что медсестры должны иметь больше права голоса при принятии больничных кадровых решений. Многие, по ее словам, не получают почти никакого уведомления, когда их графики меняются, и ожидается, что они появятся на работе на следующий день. Она сказала, что профсоюз требует, чтобы медсестры получали свои месячные расписания как минимум за две недели, и чтобы больница консультировалась с медсестрами, чтобы удовлетворить неожиданные потребности в персонале.
Раш, которая работала в трех других больницах за свою 36-летнюю карьеру медсестры, добавила, что Logan Health не работает прозрачно и не предоставляет информацию о бюджете своим передовым медицинским работникам.Она сказала, что ее предыдущие работодатели ценили «совместное управление» и лучше справлялись с наймом медсестер.
«Я знаю, как это может быть хорошо», — сказал Раш. «И именно поэтому не было текучки кадров, потому что вас хорошо поддерживали, и у нас было настоящее совместное управление. Мы действительно могли прийти и сказать: «Послушайте, это проблема. Нам нужно ее решить», и они слушали и мы бы это уладили».
МИТЧ ЙОДЕР, дипломированная медсестра, проработавшая в больнице в течение семи лет в отделении промежуточной помощи и в лаборатории катетеризации, сказала, что медсестры были вынуждены бастовать, потому что руководство Logan Health «не вело торга добросовестно.
«Мы действительно дали им все возможности, чтобы дать нам справедливую заработную плату, дать нам шкалу прожиточного минимума и платить нам справедливо по всем направлениям», сказал Йодер. «И в основном они не сдвинулись с места».
Йодер сказал, что его в первую очередь беспокоит соотношение медсестер и пациентов в больнице и частая текучесть кадров среди зарегистрированных медсестер, которая, по утверждению руководства Logan Health, ниже, чем в среднем по стране.
«Когда я работал на этаже в отделении промежуточного ухода, у нас была эта постоянная вращающаяся дверь: люди проходили обучение, начинали здесь в качестве новых медсестер, а затем переходили в другие области, потому что там им платят больше», — сказал Йодер.
«Удержание медсестер — огромная проблема для безопасности пациентов», — добавил он. «Каждый раз, когда медсестра меняется, это означает обучение нового персонала. И, в конечном счете, безопаснее иметь медсестер, которые имеют опыт, стаж работы и понимают процесс, чем постоянно обучать новых людей».
После того, как на прошлой неделе профсоюз пообещал объявить забастовку, Logan Health выступила с заявлением, чтобы заверить пациентов, что у них будут медсестры, готовые работать. Должностные лица больницы заявили, что более 150 медсестер предложили работу во время забастовки, а бывшие сотрудники предложили присоединиться по мере необходимости.Врачи и практикующие медсестры также вызвались помочь с уходом за больными.
Кроме того, по данным Logan Health, более 100 медсестер, которые должны были работать в дни забастовки, обязались выполнять свои смены, а другие, которые не были запланированы, вызвались работать добровольцами.
В преддверии забастовки SEIU обвинила Logan Health в усилиях по уничтожению профсоюзов, в то время как руководство больницы обвинило профсоюз в применении принуждения и ненадлежащей тактики давления.
В электронном письме сотрудникам во вторник утром президент и главный исполнительный директор Logan Health доктор Крейг Ламбрехт выдвинул расплывчатые обвинения в «угрожающих сообщениях и комментариях», исходящих от членов профсоюза.
«За последние несколько недель, когда SEIU организовала забастовку наших медсестер, мы слышали сообщения об издевательствах и запугивании медсестер, которые решили пересечь линию пикета и которые не разделяют точку зрения SEIU», — написал Ламбрехт. «Мы также слышали от пациентов о негативных дискуссиях профсоюза медсестер, когда они находились в нашей больнице, получая лечение. Я не мог быть более разочарован.
«Угрожающие тексты и комментарии никогда не должны быть частью семьи опекуна, а негативные комментарии не должны произноситься во время лечения пациента или быть частью опыта пациента», — продолжил он. «Поэтому я призываю SEIU прекратить поощрять такое поведение в любых условиях в KRH».
Должностные лица больницы не стали уточнять конкретный характер предполагаемых угроз.
«Мы слышали сообщения о запугивании и угрозах в отношении медсестер, не желающих бастовать», — сообщил в электронном письме представитель Logan Health Крис Леопольд.«В настоящее время мы не можем раскрывать какие-либо подробности этих отчетов».
С помощником редактора Чадом Соколом можно связаться по телефону 406-758-4439 или по электронной почте [email protected]. Репортер Брет Энн Сербин внесла свой вклад в этот отчет.
Kelly ArmorSteel KRH 11R22.5 146/143L H (16 Ply) AS A/S Всесезонная шина
ВАЖНАЯ ИНФОРМАЦИЯ. Этот товар имеет увеличенный размер. ДОЛЖЕН быть отправлен с LTL-Freight Service.
- Минимальный заказ 4 (ЧЕТЫРЕ) ШИНЫ.
- Этот товар может быть доставлен ТОЛЬКО по адресам в пределах КОММЕРЧЕСКИХ или ПРОМЫШЛЕННЫХ зон и районов.
- Этот товар НЕ МОЖЕТ быть доставлен в жилые зоны, районы и адреса.
- Предприятия, работающие вне дома, считаются жилыми.
- Фермы, удаленные/сельские адреса и некоторые коммерческие адреса считаются труднодоступными для грузовых автомобилей LTL и могут не покрываться нашей бесплатной доставкой.
- Наряду с действительным коммерческим адресом необходимо указать действительное название компании.
- Задняя дверь для облегчения разгрузки Товара может быть БЕСПЛАТНО включена в транспортное средство LTL-Freight для доставки.
- Заказы, требующие доставки LTL, будут отправлены в течение 3 рабочих дней после предоставления и подтверждения действительного адреса.
- Персонал службы доставки LTL-грузов НЕ доступен для дополнительных запросов во время доставки Товара.
- Любые изменения (например, исправления адреса) после отправки заказа НЕ возможны.
Kelly Armorsteel KRH
Особенности и льготы Обзор Обзор Kelly Armorsteel KRH — это шоссе, все сезона шины, изготовленные для коммерческого транспорта. Эта модель была сделана для всех положений оси. Рисунок протектора с симметричным ребристым рисунком и всесезонный состав резиновой смеси улучшают сцепление при любой погоде. Более сильное сцепление с поверхностью и прочный состав шины снижают давление, воздействующее на шину, что снижает сопротивление качению. Сопротивление качению — это давление, которое определяет необходимый уровень потребления топлива автомобилем, необходимый для поддержания движения шин. Снижение сопротивления качению позволяет шине значительно снизить выбросы CO2 автомобиля и расход топлива, гарантируя экономичное вождение. Прочный состав и ребристый рисунок протектора также повышают удобство использования. Более прочные составные элементы оптимизируют гибкость резины, значительно замедляя общую скорость износа протектора. Симметричный ребристый рисунок протектора позволяет шине равномерно распределять давление движения по всей площади протектора. Равномерно распределяемые силы ускорения позволяют избежать преждевременного и неравномерного износа, значительно повышая общую скорость износа протектора. ArmorSteel KRH также имеет конструкцию усиленного стального ремня.Эта усиленная конструкция позволяет шине всегда сохранять идеальную форму. Таким образом, шина не деформируется под нагрузкой и давлением вождения, что повышает грузоподъемность. Идеальная форма шины также поддерживает контакт с поверхностью на протяжении всего движения, что повышает отзывчивость рулевого управления и устойчивость при вождении. Это также значительно повышает управляемость шины. Возможны расхождения в размерах между марками и моделями шин, которые имеют такой размерный формат.Поскольку производители указывают только ширину шины и диаметр обода этих шин, разные марки и модели могут иметь разные размеры. Чтобы убедиться, что куплен правильный размер, следует проверить необходимый общий диаметр шины. Общий диаметр или Н.Д. рекламируемый представляет собой общий диаметр шины в дюймах после того, как шина была правильно накачана и установлена в соответствии с рекомендациями производителя. Этот рекламируемый номер предоставляется Priority Tire производителем шин. 30 декабря 2020 г. Региональная система здравоохранения Калиспелла в Калиспелле, штат Монтана, согласилась на урегулирование в размере 4,2 миллиона долларов после утечки данных, от которой пострадали 130 000 пациентов. В мае 2019 года хакеры развернули успешную фишинговую атаку по электронной почте, нацеленную на сотрудников KRH, которые предоставили им учетные данные, необходимые для доступа к конфиденциальной информации, в том числе: В результате взлома и его последующей огласки несколько пациентов подали иски, в которых утверждалось, что KRH не смогла должным образом обучить сотрудников тому, как правильно распознавать фишинговые схемы и защищать защищенную медицинскую информацию (PHI). СМОТРИТЕ ТАКЖЕ: Почему инвестиции в постоянное обучение кибербезопасности — это выгодно Однако это было оспорено генеральным директором KRH Крейгом Ламбертом, который отметил, что фирма, занимающаяся кибербезопасностью, назвала KRH «верхним квартилем готовности к защите данных». Хотя KRH может опровергнуть утверждения о плохом протоколе безопасности, Единый закон штата Монтана об информации о здравоохранении позволяет жертвам утечки данных подавать в суд на поставщиков медицинских услуг за нарушения, связанные с атакой. Компенсация KRH включает 4 200 000 долларов США в качестве возмещения убытков пациентов в дополнение к услугам Experian, в том числе: Независимо от того, активно ли KRH игнорировала протоколы кибербезопасности, ее усилий было недостаточно, чтобы противостоять фишингу электронной почты. Как только эти мошенничества будут обнаружены и о них будет сообщено, многие регулирующие органы не только на уровне штата, но и на национальном уровне (HHS и OCR) ждут, чтобы наложить на организации существенные штрафы.Kalispell Regional Healthcare, безусловно, не первая и не последняя, кто столкнулся с гневом. СМОТРИТЕ ТАКЖЕ: Ортопедическая клиника платит 1,5 миллиона долларов США за урегулирование системного несоблюдения правил HIPAA Чем изощреннее атака, тем выше вероятность того, что сотрудники передадут важную информацию о безопасности, которая может поставить под угрозу PHI. Вам нужно будет повысить свою безопасность, инвестируя в решение электронной почты, сертифицированное HITRUST CSF, совместимое с HIPAA. Paubox Email Suite Plus эффективно снижает риски фишинга за счет: Одним из самых интересных выводов здесь является то, что аудиторская фирма по кибербезопасности отнесла KRH к первому квартилю среди всех медицинских организаций по соблюдению требований кибербезопасности. Это указывает на серьезный разрыв между защитой медицинских организаций и возможностями потенциальных хакеров. Чтобы восполнить этот пробел, важно внедрить надежный план обеспечения безопасности, который не только эффективно обучает сотрудников, но и использует программное обеспечение электронной почты, совместимое с HIPAA, которое в первую очередь предотвращает попадание фишинговых атак в папку «Входящие». Попробуйте Paubox Email Suite Plus БЕСПЛАТНО сегодня. Низкомолекулярный непептидный компонент KRH-1636 эффективно блокирует репликацию различных Т-линейно-тропных (X4) ВИЧ типа 1 (ВИЧ-1) в клетках МТ-4 и мононуклеарных клетках периферической крови за счет ингибирования проникновения вируса и слияние мембран через корецептор хемокинового рецептора CXC (CXCR)4, но не через хемокиновый рецептор CC 5.Он также ингибировал связывание хемокина CXC, фактора 1α, полученного из стромальных клеток, специфически с CXCR4 и последующую передачу сигнала. KRH-1636 предотвращал связывание моноклональных антител с CXCR4 без понижающей модуляции корецептора. Ингибирующее действие KRH-1636 на репликацию вируса X4 было четко воспроизведено в системе мышей лимфоциты периферической крови/тяжелый комбинированный иммунодефицит. Кроме того, это соединение всасывалось в кровь после интрадуоденального введения, о чем судили по анти-ВИЧ-1 активности и МС жидкостной хроматографии в плазме.Таким образом, KRH-1636 представляется многообещающим средством для лечения инфекции ВИЧ-1. На сегодняшний день высокоактивная антиретровирусная терапия ВИЧ типа 1 (ВИЧ-1) привела к значительному эффекту в виде снижения степени вирусной нагрузки, улучшения количества CD4 + Т-клеток и часто значительного выздоровления от болезни в инфицированных лиц (1–4). Однако из-за многих факторов, таких как возможное появление лекарственно-устойчивых мутантов, побочные эффекты и высокая стоимость, по-прежнему существует большая потребность в улучшенных методах лечения. Хемокиновый рецептор CXC (CXCR)4 является корецептором для проникновения Т-линейно-тропных (X4) штаммов ВИЧ-1, а CC-хемокиновый рецептор (CCR)5 служит корецептором для макрофагально-тропных (R5) штаммов ВИЧ-1 (5–8). Кроме того, фактор 1α, полученный из стромальных клеток хемокина CXC (SDF-1α), блокирует инфекцию лимфоцитов изолятами X4 ВИЧ-1 (9, 10), а хемокины CC, регулируемые при активации, экспрессируют и секретируют нормальные Т-клетки (RANTES ), макрофагальный воспалительный белок (MIP)-1α и MIP-1β, которые являются лигандами для CCR5, ингибируют инфекцию изолятов R5 ВИЧ-1 (11). Эти наблюдения позволяют предположить, что хемокины или производные хемокинов или низкомолекулярные антагонисты или агонисты рецепторов хемокинов могут быть полезны для лечения инфекции ВИЧ-1. Действительно, сообщается, что несколько групп низкомолекулярных соединений ингибируют инфекцию ВИЧ-1, включая бициклам AMD3100 (12–14) и 18-мерный пептид T22 (15, 16), которые эффективно блокируют проникновение ВИЧ-1 и инфекцию через CXCR4. . Совсем недавно было обнаружено, что непептидное соединение с небольшой молекулярной массой, названное TAK-779, является мощным и селективным антагонистом CCR5 (17).К сожалению, эти соединения нельзя вводить перорально. Мы считаем, что пероральная доступность является одной из ключевых проблем, которую необходимо решить для препаратов против ВИЧ в пользу ВИЧ-1-инфицированных, поскольку ВИЧ-1-инфекция является хронической и пожизненной. Поэтому мы сосредоточились на разработке перорально доступных антагонистов хемокинов. В этом исследовании описывается открытие мощного антагониста CXCR4 с небольшой непептидной молекулой, которую можно вводить перорально. Синтез и очистка KRH-1636, N -{( S )-4-гуанидино-1-[( S )-1-нафталин-1-ил-этилкарбамоил]бутил}-4-{ [(пиридин-2-ил-метил)амино]метил}бензамид (рис. 1 a ), его метансульфонированный аналог и AMD3100 были проведены в Kureha Chemical Industry (Токио). Эти соединения растворяли в диметилсульфоксиде в концентрации 10 мМ, чтобы исключить любое противовирусное или цитотоксическое действие диметилсульфоксида. T22 был любезно предоставлен Seikagaku Kogyo (Токио). Химическая структура антагониста CXCR4, KRH-1636, и его активность против ВИЧ-1. ( a ) Химическая структура KRH-1636. ( b ) Активность KRH-1636 против ВИЧ-1 в клетках МТ-4, измеренная с помощью анализа МТТ. В этом исследовании использовали HTLV-IIIB ВИЧ-1 (–□–, ложно инфицированный; –■–, ВИЧ-1). ( c ) Анти-ВИЧ-1 (NL4-3) активность KRH-1636 в анти-CD3/CD28-стимулированных РВМС, определенная анализом p24. –■–, КРХ-1636; –⋄–, 3100 драмов РА. ( d ) Ингибирование слияния клеток с помощью KRH-1636.①, клетки MOLT-4; ②, сокультура; ③, 5 мкМ KRH-1636; ④, 0,5 мкМ KRH-1636; ⑤, 0,05 мкМ KRH-1636; ⑥, 0,005 мкМ KRH-1636. клетки вируса Т-клеточного лейкоза человека (HTLV)-IIIB МТ-4, MOLT-4 и MOLT-4/ВИЧ-1 поддерживали в среде RPMI 1640 с добавлением 10% FCS и антибиотиков (100 мкг/мл пенициллина/100 мкг /мл стрептомицина). Клетки остеосаркомы человека (HOS), экспрессирующие хемокиновые рецепторы, были любезно предоставлены H. Hoshino (Университет Гумма, Маэбаси, Япония) и содержались в среде DMEM с добавлением 10% FCS и антибиотиков.Мононуклеарные клетки периферической крови (РВМС) ВИЧ-1-серонегативных здоровых доноров выделяли центрифугированием в градиенте плотности, выращивали в среде RPMI 1640 с добавлением 10% FCS и активировали либо 1 мкг/мл фитогемагглютинина (ФГА, Sigma-Aldrich) для 3 дня или моноклональные антитела против CD3/CD28 в присутствии IL-2 (20 ЕД/мл, Шионоги, Осака) при 37°С. Штаммы X4 ВИЧ-1 IIIB и NL4-3 были получены из культурального супернатанта клеток MOLT-4/HTLV-IIIB и клеток COS-1, трансфицированных молекулярным клоном, соответственно, как описано (18, 19).Аликвоты вирусных запасов хранили при -80°C до использования. Титр запасов вируса определяли титрованием конечной точки 5-кратного предельного разведения в четырех повторностях на клетках МТ-4. Несколько клинических изолятов, включая штаммы X4 (YU-6, YU-10 и YU-11) (20) и штаммы R5 (YU-1 и YU-2) (21), размножались в лимфоцитах периферической крови (PBL) после стимуляции ФГА. CD4 + Т-клетки от нормального донора активировали магнитными шариками, связанными моноклональными антителами против CD3/CD28, в среде RPMI 1640, содержащей человеческий рекомбинантный IL-2 (rIL-2)/10% FCS, в течение 7 дней.Эти активированные клетки обрабатывали 10 мкМ AMD3100 или KRH-1636 в среде, содержащей IL-2, при 37°C в течение 1 часа. После промывания холодным PBS, содержащим 2% FCS и 0,1% NaN3 [буфер для сортировки флуоресцентно-активированных клеток (FACS)], клетки предварительно обрабатывали нормальным IgG человека в концентрации 0,1 мг/мл в буфере FACS в течение 15 минут на льду для блокирования Fc. рецепторов, а затем окрашивали непосредственно 12G5-фикоэритрином (PharMingen) в течение 30 минут или косвенно крысиными моноклональными антителами IgG1 A145, A80 (22) и T227 в концентрации 5 мкг/мл в течение 30 минут с последующим окрашиванием козьим антикрысиным IgG-FITC (DAKO) лечение в течение 30 мин на льду.После промывки клетки фиксировали 1% параформальдегидом в буфере FACS в течение 5 мин при комнатной температуре, а затем анализировали на проточном цитометре FACSCalibur (Becton Dickinson) с программным обеспечением CELLQUEST (Becton Dickinson). Область положительного результата определяли с использованием соответствующего изотипа мышиного моноклонального антитела (Beckman Coulter) и крысиного моноклонального антитела против вируса гепатита С, Mo8 изотипа IgG1 (23). Анализ 3-(4,5-диметилтиазол-2-ил)-3,5-дифенилформазана (МТТ, Sigma-Aldrich) с использованием клеток МТ-4 проводили, как описано (24, 25).Для анализа накопления p24 PBMC, стимулированные ФГА, инфицировали ВИЧ-1 в присутствии различных концентраций испытуемых соединений, если не указано иное (16). клеток MOLT-4 и MOLT-4/ВИЧ-1 HTLV-IIIB совместно культивировали в течение 1 дня, как описано (26). кДНК человека для CCR3 (27), CCR4 (28), CCR5 (29) и CXCR1 (30) амплифицировали с помощью ПЦР из библиотеки кДНК РВМС, стимулированной ФГА человека, и клонировали в pcDNA3.1(+) вектор экспрессии с цитомегаловирусным промотором (Invitrogen). Трансфекцию проводили клетками яичника китайского хомяка (СНО) с использованием липофектамина (Life Technologies, Гранд-Айленд, Нью-Йорк) и отбирали стабильные трансфектанты в присутствии 600 мкг/мл генетицина (Life Technologies). клеток СНО, экспрессирующих МТ-4, СНО или хемокиновый рецептор (5×10 6 клеток на 0,2 мл на лунку), культивировали в 24-луночном микротитрационном планшете.Через 24 ч инкубации при 37°С культуральную среду заменяли буфером для связывания (среда RPMI 1640 с добавлением 0,1% БСА). Реакции связывания проводили на льду в течение 2 ч в присутствии [ 125 I]SDF-1α [Daiichi Kagaku Yakuhin, Tokyo; удельная активность, 2200 Ки/ммоль (1 Ки = 37 ГБк)] и различные концентрации тестируемого соединения. Реакцию связывания останавливали путем отмывания свободного лиганда холодным PBS и подсчитывали связанную с клетками радиоактивность с помощью сцинтилляционного счетчика (Packard Japan, Tokyo). клеток HOS/CXCR4, нагруженных Fura2-ацетоксиметиловым эфиром, инкубировали в отсутствие или в присутствии различных концентраций KRH-1636. Изменения внутриклеточного уровня Ca 2+ в ответ на SDF-1α (1 мкг/мл) определяли с помощью флуоресцентного спектрофотометра. Самка С.Мыши B-17 SCID были приобретены у CLEA Japan (Токио). и.п. и внутриселезеночный перенос клеток проводили на мышах в возрасте от 6 до 8 недель. Мышей SCID истощали по естественным клеткам-киллерам с помощью внутрибрюшинного введения. инъекция крысиного моноклонального антитела TMβ-1 против мышиного IL-2Rβ (31) (1 мг на животное). Через 1 день 1×10 7 РВМС человека вводили в брюшину вместе с человеческим rIL-4 (0,4 мкг на животное; PeproTech, Rocky Hill, NJ). На следующий день KRH-1636 (0,1 мл 2 мМ раствора на животное) или контроль (0.1 мл только среды) вводили внутрибрюшинно. Штамм NL4-3 ВИЧ-1 (0,2 мл 1 × 10 4 культуры ткани 50% инфекционной дозы на миллилитр запаса) инфицировали внутрибрюшинно. На 1–7-е сутки после инфицирования такую же дозу KRH-1636 или среды вводили внутрибрюшинно. В 1, 3, 5 и 7 дни после заражения также вводили 0,4 мкг rIL-4 внутрибрюшинно. На 9-й день после инфицирования собирали плазму и жидкость перитонеального лаважа (4 мл) и анализировали на ВИЧ-1 p24 с помощью набора ELISA. Одновременно подсчитывали количество CD4 + и CD8 + Т-клеток. Для интраселезеночной инокуляции 1,5 × 10 6 РВМС трансплантировали в селезенку вместе с человеческим rIL-4 (0,4 мкг) через 2 дня после обработки TMβ-1. В тот же день KRH-1636 (0,1 мл 2 мМ раствора на животное) или контроль (только 0,1 мл среды) вводили внутрибрюшинно. Через 1 день мышей заражали внутрибрюшинно. со штаммом NL4-3 ВИЧ-1 (0,2 мл 1×10 4 культуры ткани 50% инфекционной дозы на миллилитр запаса). На 1–4-е сутки после заражения мышам вводили внутривенно.п. при повторных дозах KRH-1636 или сред. На 4-й день после инфицирования 0,2 мкг rIL-4 также инокулировали внутрибрюшинно. На 12-й день после инфицирования собирали плазму и жидкость перитонеального лаважа (4 мл) и анализировали на ВИЧ-1 p24. Был проведен краткосрочный тест in vivo . Мышей лечили TMβ-1. Через 24 часа их лечили KRH-1636 (0,2 мл внутрибрюшинно) в течение 30 минут. Затем животным вводили внутрибрюшинно. с 4 × 10 6 PBMC, активированными анти-CD3/анти-CD28 антителами в течение 6 дней и впоследствии инфицированными ВИЧ-1 (1–2 × 10 3 культуры тканей, 50% инфекционной дозы на 0.1–0,2 мл в/б) в течение 2 ч. Клетки перитонеального лаважа собирали и культивировали в среде, содержащей IL-2 (20 единиц/мл). Через девять дней после культивирования проводили анализ p24 на культуральных супернатантах. самца крыс Wistar (возраст 6 недель, CLEA Japan) использовали для исследований in vivo . KRH-1636 или метансульфированный KRH-1636 растворяли в 45% гидроксипропил-β-циклодекстрине. После акклиматизации в течение как минимум 1 недели крыс не кормили в течение ≈18 ч перед введением KRH-1636, анестезировали диэтиловым эфиром, а затем перевязывали привратник. KRH-1636 вводили в двенадцатиперстную кишку через зонд в дозе 200 мг/мл на кг (две крысы для KRH-1636 и три крысы для метансульфированного KRH-1636). Образцы крови брали из шейно-венозного отдела с помощью шприца, обработанного гепарином, через 0,25, 0,5, 1, 2, 4 и 6 ч после введения и центрифугировали для отделения плазмы. Далее 100 мкл плазмы смешивали с 400 мкл 0.1% муравьиная кислота/метанол. После центрифугирования (Kubota, Tokyo) при 15000 об/мин в течение 5 мин супернатант выпаривали досуха в токе азота, образцы растворяли в растворе 25% ацетонитрила/0,1% муравьиной кислоты и анализировали на жидкостном хроматографическом масс-спектроскопе QP8000α ( Шимадзу). Анти-ВИЧ-1-активность в серийно разбавленной крысиной сыворотке с полной средой измеряли с помощью анализа МТТ с использованием клеток МТ-4. Более 1000 соединений из химической библиотеки Kureha Chemical Industry исследовали на анти-ВИЧ-1-активность с помощью стандартного МТТ-теста с использованием клеток CXCR4 + MT-4. Путем оптимизации ведущего соединения мы обнаружили, что KRH-1636 (рис. 1 a ) является чрезвычайно мощным ингибитором репликации ВИЧ-1 в клетках МТ-4. Химия будет описана в другом месте. KRH-1636 полностью ингибировал репликацию X4 ВИЧ-1 (штамм IIIB) в клетках МТ-4 при такой низкой концентрации, как 0.06 мкМ (рис. 1 b ). Его 50% и 90% эффективные концентрации (EC 50 и EC 90 ) составляли 0,0193 и 0,0478 мкМ соответственно. 50% цитотоксическая концентрация (CC 50 ) KRH-1636 составляла 406,21 мкМ при использовании клеток МТ-4. Таким образом, индекс селективности (отношение CC 50 к EC 50 ) KRH-1636 был >10000, что указывает на то, что это соединение является чрезвычайно активным и селективным. Ингибирующая активность KRH-1636 в отношении репликации X4 HIV-1 (NL4-3) в PBMC также была продемонстрирована с помощью анализа накопления p24 в культуральных супернатантах клеток, инфицированных вирусом. KRH-1636 (0,0003–20 мкМ) снижал уровни антигена дозозависимым образом в любой момент времени (рис. 1 c ). KRH-1636 также был эффективен против HTLV-IIIB и трех клинических изолятов, включая YU-6 (20), YU-10 и YU-11, и продемонстрировал силу действия, аналогичную активности штамма NL4-3 (таблица 1). . Напротив, KRH-1636 был неэффективен против инфекций R5 HIV-1, YU-1, YU-2 (ссылка 21; таблица 1) и NL4-3 с модифицированной оболочкой (данные не показаны) в РВМС. Специфические ингибиторы CXCR4, T22 и AMD3100, полностью ингибировали репликацию штамма IIIB при 0.3 и 0,28 мкМ соответственно, хотя они не ингибировали репликацию штамма R5 ВИЧ-1 Ba-L при концентрациях до 100 мкМ (данные не показаны). Активность KRH-1636 против ВИЧ-1 в PBMCs KRH-1636, по-видимому, ингибировал образование синцития между MOLT-4 и его ВИЧ-1-конвертированными клетками MOLT-4 (рис. 1 d ). Это указывало на то, что KRH-1636 проявлял свой эффект на начальной стадии инфекции ВИЧ-1, такой как проникновение вируса и слияние мембран в клетках-мишенях. Все эти данные показывают, что эффект KRH-1636 очень похож на эффект T22 и AMD3100, и убедительно свидетельствуют о том, что KRH-1636 может влиять на функцию CXCR4 в качестве корецептора. Чтобы выяснить, оказывает ли KRH-1636 свое действие в качестве антагониста CXCR4, было изучено ингибирующее действие соединения на связывание лиганда с корецептором с использованием клеток MT-4, которые спонтанно экспрессируют CXCR4.Результат показал, что связывание [ 125 I]SDF-1α было эффективно и дозозависимо подавлено, показывая, что IC 50 KRH-1636 (фиг. 2 a ) и контрольного AMD3100 составляет 0,013 мкМ и 0,068 мкМ. , соответственно. Чтобы определить, является ли ингибирующее действие KRH-1636 на связывание хемокинов специфичным для CXCR4, активность KRH-1636 исследовали в клетках CHO, стабильно экспрессирующих CXCR1, CCR3, CCR4 или CCR5. Это соединение не влияло на связывание [ 125 I]IL-8, [ 125 I]эотаксин, [ 125 I]TARC (хемокин, регулируемый тимусом и активацией) или [ 125 I ]RANTES к CXCR1, CCR3, CCR4 и CCR5 соответственно (рис. 2 и ). Эти данные ясно демонстрируют, что KRH-1636 избирательно ингибирует связывание SDF-1α с CXCR4. Ингибирующее действие KRH-1636 на связывание хемокинов с клетками и SDF-1α-индуцированную мобилизацию Ca 2+ в клетках HOS/CXCR4. ( a ) Ингибирующее действие KRH-1636 на связывание хемокинов с клетками CHO, экспрессирующими MT-4 или CXCR1-, CCR3-, CCR4- или CCR5. Процент связывания рассчитывали как 100 × [(связывание с ингибитором — неспецифическое связывание)/(связывание без ингибитора — неспецифическое связывание)].TARC, хемокин, регулируемый тимусом и активацией. ( b ) Ингибирующее действие KRH-1636 на SDF-1α-индуцированную мобилизацию Ca 2+ в клетках HOS/CXCR4. В экспериментах по мобилизации Ca 2+ , индуцированных хемокинами, SDF-1α явно увеличивал внутриклеточный уровень Ca 2+ в клетках HOS/CXCR4 при концентрации 1 мкг/мл (фиг. 2 b ).Добавление 10 мкМ KRH-1636 не влияло на уровень Ca 2+ , но сильно отменяло вызванное SDF-1α повышение внутриклеточного уровня Ca 2+ в клетках HOS/CXCR4, и эффект зависел от дозы. (рис. 2 б ). Напротив, это соединение не влияло на мобилизацию Ca 2+ , индуцированную RANTES, MCP-1, эотаксином, хемокином макрофагального происхождения и MIP-1α в HOS/CCR1, HOS/CCR2b, HOS/CCR3, HOS/CCR4. и клетки HOS/CCR5 соответственно, даже при концентрации 10 мкМ (данные не показаны).Эти результаты показывают, что KRH-1636 избирательно блокирует CXCR4-опосредованную передачу сигналов Ca 2+ . Мы использовали четыре различных типа моноклональных антител: 12G5 [анти-CXCR4, нейтрализующие ВИЧ, распознающие его внеклеточную петлю (ECL)1 и -2], A145 (анти-CXCR4, распознающие его N-конец), A80 (анти-CXCR4, распознающие его N-конец). , усиливающий ВИЧ, распознающий его ECL3) и T227 (анти-CCR5), для изучения взаимодействия KRH-1636 с CXCR4. Связывание моноклональных антител 12G5 и A80, но не моноклональных антител A145 и T227, с CD3-активированными Т-клетками резко ингибировалось KRH-1636 (рис. 4, опубликованная в качестве вспомогательной информации на веб-сайте PNAS, www.pnas.org). Интересно, что контрольный антагонист AMD3100 показал аналогичный результат. На основании этих данных настоятельно предполагается, что KRH-1636 ингибирует связывание 12G5 и A80 с CXCR4, не вызывая понижающей модуляции молекулы CXCR4 и не влияя на экспрессию CCR5. KRH-1636 исследовали, чтобы определить, ингибирует ли он репликацию вируса X4 in vivo . Для этого мы использовали как долгосрочные, так и краткосрочные анализы in vivo с человеческими мышами PBL/SCID. Для долгосрочных испытаний мы применяли две разные системы, в которых мышей PBL/SCID человека конструировали либо внутрибрюшинно, либо внутрибрюшинно. или интраселезеночная инокуляция РВМС. Поскольку эффект инфекции вируса X4 (NL4-3) не так ясен, как эффект инфекции вируса R5 у мышей PBL/SCID человека, C.Мышей B-17 обрабатывали человеческим rIL-4 в течение периода инфекции для усиления репликации X4 HIV-1 (см. Материалы и методы ). Количество p24 в жидкости перитонеального лаважа у пяти из семи животных с РВМС, которым вводили внутрибрюшинно. были ниже определяемого уровня у мышей, получавших KRH-1636, через 9 дней после заражения, тогда как виремия была отмечена у всех семи нелеченых мышей (таблица 2). Однако снижение количества ВИЧ-1-инфицированных CD4 + Т-клеток не было очевидным у нелеченых мышей в настоящих экспериментальных условиях (данные не показаны).Точно так же количество p24 в плазме и перитонеальном лаваже у двух животных с РВМС, которым вводили интраселезенку, было ниже обнаруживаемого уровня у мышей, получавших KRH-1636, после заражения, тогда как виремия была отмечена у трех необработанных мышей (данные не показаны). В краткосрочном тесте in vivo KRH-1636 явно ингибировал репликацию вируса и ВИЧ-1-индуцированное снижение CD4 + Т-клеток, как наблюдалось в анализах in vitro (таблица 3). Эффекты KRH-1636 против ВИЧ-1 у мышей PBL-SCID человека по оценке долгосрочного теста in vivo Эффекты KRH-1636 против ВИЧ-1 у мышей PBL-SCID человека по оценке краткосрочного in vivo теста Наконец, всасываемость KRH-1636 исследовали на крысах, как описано в Материалы и методы . Концентрацию KRH-1636 в плазме или сыворотке контролировали жидкостной хроматографией МС (плазма) и анти-ВИЧ-1 активностью (сыворотка) после интрадуоденального введения. Для повышения доступности препарата метансульфонированный аналог KRH-1636 также был синтезирован и изучен аналогичным образом. Результаты показали, что эти соединения эффективно всасывались из двенадцатиперстной кишки крыс (рис.3, a для KRH-1636 и b для метансульфированного KRH-1636). Биодоступность KRH-1636 и метансульфонированного KRH-1636 в этом эксперименте оценивалась как ≈7% и 69%, соответственно, по данным жидкостной хроматографии МС. Кроме того, EC 50 (%) и EC 90 (%) сыворотки через 60 минут после введения KRH-1636 составляли 0,18 и 0,27 соответственно, как определено с помощью анализа МТТ с использованием клеток МТ-4 (фиг. 3 с ). В этом эксперименте концентрация KRH-1636 в плазме через 60 минут после введения составляла 30.6 мкМ. Следовательно, концентрация KRH-1636 в крови достигла уровней, ингибирующих репликацию ВИЧ. Всасываемость KRH-1636 и метансульфированного KRH-1636 после интрадуоденального введения крысам Wistar. Двум и трем крысам вводили KRH-1636 ( и ) и метансульфонированный KRH-1636 (b ) соответственно. Каждый символ представляет данные от каждого животного. ( c ) Анализ МТТ проводили с использованием клеток МТ-4 для определения EC 50 (%) и EC 90 (%) сыворотки через 60 минут после введения KRH-1636.–□–, KRH-1636/макет; –■–, КРХ-1636/ВИЧ-1; –○–, контроль/макет; –●–, контроль/ВИЧ-1. В этом отчете демонстрируется антагонист CXCR4, всасываемый в двенадцатиперстной кишке, KRH-1636, который обладает мощной активностью против ВИЧ как in vivo , так и in vitro . KRH-1636 избирательно ингибировал инфицирование Т-клеточной линии тропными штаммами вируса X4, включая несколько клинических изолятов, не влияя на R5 ВИЧ-1. Макрофаготропные штаммы вируса R5 выделяются у людей вскоре после сероконверсии и в течение бессимптомного периода заболевания, по-видимому, ответственны за половую и парентеральную передачу и представляют собой наиболее распространенный фенотип (32, 33). Напротив, изоляты Х4 ВИЧ-1, как правило, появляются у инфицированных лиц на более поздних стадиях инфекции при переходе от бессимптомного к симптоматическому состоянию и могут быть вовлечены в быстрое снижение CD4 + Т-лимфоцитов и прогрессирование до СПИДа из-за сильного цитопатия (34). Поэтому важно найти методы лечения, ингибирующие опосредованную CXCR4 инфекцию X4 ВИЧ-1, чтобы заблокировать прогрессирование заболевания до СПИДа. Ингибирование хемокиновых рецепторов с помощью KRH-1636, по-видимому, было специфичным для CXCR4, поскольку KRH-1636 сильно ингибировал связывание [ 125 I]SDF-1α с клетками МТ-4 (рис.2 и ). Кроме того, это соединение не ингибировало связывание хемокинов с CXCR1, CCR3, CCR4 или CCR5. Следовательно, было показано, что ингибирующий эффект KRH-1636 является селективным в отношении CXCR4. Ингибирующее действие KRH-1636 на связывание моноклональных антител с CXCR4 (рис. 4) также подтверждает это мнение. Специфичность KRH-1636 в отношении CXCR4 кажется чрезвычайно важной с химиотерапевтической точки зрения, поскольку неспецифическое ингибирование рецепторов β-хемокинов может вызывать серьезные побочные эффекты, связанные с нарушением регуляции хемокинов. Подобно AMD3100, KRH-1636 не индуцировал интернализацию CXCR4 (рис. 4). Однако KRH-1636 подавлял связывание анти-CXCR4-антител, A80 и 12G5, с активированными CD4 + Т-клетками. Поскольку эти моноклональные антитела направлены на разные ECL семитрансмембранного рецептора CXCR4, возможно, что KRH-1636 может взаимодействовать со всеми тремя ECL. Альтернативно, KRH-1636 может индуцировать конформационные изменения в CXCR4 после связывания с другим сайтом корецептора.Точный сайт на молекуле CXCR4, на которую нацелено это соединение, еще предстоит определить. Пероральная доступность остается одной из ключевых целей, которую необходимо достичь в качестве препарата против ВИЧ, поскольку ретровирусная инфекция сохраняется на протяжении всей жизни инфицированных людей. Так, пероральное введение KRH-1636 проводили крысам и мышам SCID (данные не представлены), у которых определяли концентрации соединения в плазме и фармакокинетические параметры. Хотя об измеримом поглощении доступных в настоящее время антагонистов хемокиновых рецепторов не сообщалось, с KRH-1636 был достигнут существенный перенос не только как химическое, но и как активное анти-ВИЧ соединение из желудочно-кишечного тракта в кровь. Необходимо дальнейшее улучшение пероральной доступности и усиление проникновения в центральную нервную систему. C.B-17 SCID обнаруживают множественные иммунологические дефекты, и было продемонстрировано, что этот мутантный штамм эффективно получает PBL человека (35). После заражения ВИЧ-1 типа R5, включая штаммы JR-CSF и NFN-SX, мог очень эффективно реплицироваться в связи с очевидным истощением CD4 + Т-клеток. Однако вирус Х4 плохо реплицируется в этой системе, поэтому снижение количества CD4 + Т-клеток не является очевидным (36).Чтобы преодолеть эту проблему, мышей лечили человеческим IL-4, поскольку наш предварительный результат показал, что штаммы вируса X4 благоприятствуют доминантному статусу Т-хелперов 2 для их репликации и индукции снижения CD4 + Т-клеток (37). Наши исследования ясно показали ингибирующее действие KRH-1636 in vivo на репликацию вируса X4. Несмотря на то, что это исследование проводилось с использованием и. п. инъекции соединения, пероральное введение должно быть эффективным, поскольку пероральная биодоступность и эффективная адсорбция этого соединения были подтверждены на крысах и мышиной системе SCID. Остается ответить на несколько вопросов, касающихся клинических результатов терапии на основе корецепторов (38). Допустимо ли блокирование нормальной функции CXCR4, вызванное лечением антагонистами? В случае антагонистов CCR5 это будет безопасно из-за отсутствия зарегистрированных иммунологических нарушений у лиц с гомозиготами CCR5∆32. Однако ингибирование взаимодействий SDF-1α-CXCR4 может быть более проблематичным, поскольку нокаут гена SDF-1α или CXCR4 у мышей вызывает серьезные дефекты, включая аномальное кроветворение, развитие мозжечка и васкуляризацию желудочно-кишечного тракта (39–41).Не следует ли рассматривать возникновение лекарственной устойчивости как серьезную проблему? Маловероятно, что во втором ECL CXCR4 происходят частые мутации. Однако ВИЧ-1 может приобретать устойчивость к KRH-1636 в результате аминокислотных мутаций белка оболочки вируса gp120. Фактически, недавно сообщалось о X4 ВИЧ-1, устойчивом к SDF-1α и AMD3100 (42). Резистентный вирус имел множественные мутации в gp120, но не переключал использование хемокинового рецептора. Мы надеемся, что на эти и связанные с ними вопросы будут даны ответы по мере того, как терапия на основе корецепторов будет проходить клинические испытания.Острые токсикологические исследования показали отсутствие тяжелой токсичности у крыс, получавших KRH-1636 (1,5 мг/кг в сутки) внутривенно. введение в течение 4 дней (данные не показаны). В заключение, KRH-1636, который может всасываться из двенадцатиперстной кишки в кровь, кажется многообещающим агентом для лечения и профилактики ВИЧ-1-инфекции. Эта работа была поддержана грантами Министерства образования, культуры, спорта, науки и технологий Японии, Министерства здравоохранения, труда и социального обеспечения Японии и Core Research for Evolutional Science and Technology of Japan. ↵† К. И., С.Ю.-К. и Ю.Т. в равной мере внесли свой вклад в эту работу. ↵** Кому следует направлять корреспонденцию. Электронная почта: yamamoto.mmb{at}tmd.ac.jp. KRH соглашается на компенсацию в размере 4,2 миллиона долларов после утечки данных – Paubox
Рикин Шах
Что случилось?
Последствия
Суть
Предотвращение фишинговых атак с помощью Paubox
Учиться у других
Антагонист хемокинового рецептора 4 СХС, всасываемый в двенадцатиперстной кишке, KRH-1636, проявляет мощную и селективную анти-ВИЧ-1 активность
Реферат
Материалы и методы
Соединения.
Клеток.
Вирусы.
Иммунофлуоресценция.
Анализ слияния.
Конструкция ДНК и трансфекция.
Анализы связывания лигандов.
Корецептор-опосредованный Ca
2+ Передача сигналов. Инфицирование мышей человека с PBL/тяжелым комбинированным иммунодефицитом (SCID).
Обнаружение KRH-1636 в крови после интрадуоденального введения.
Результаты
KRH-1636 — мощный и селективный ингибитор Х4 ВИЧ-1.
KRH-1636 ингибирует связывание лиганда с CXCR4.
KRH-1636 ингибирует CXCR4-опосредованную передачу сигналов Ca
2+ . Взаимодействие KRH-1636 с CXCR4.
KRH-1636 блокирует репликацию X4 ВИЧ-1 у мышей человека PBL/SCID.
KRH-1636 эффективно всасывается из двенадцатиперстной кишки в кровь.
Обсуждение
Благодарности
Сноски
Сокращения
highwire.org/Journal» hwp:start=»2001-09-04″> Поступила 4 сентября 2001 г.
Главный врач KRH обсуждает вакцинацию против COVID-19 распространения вакцины против COVID-19 среди передовых медицинских работников стало большим успехом.
«В итоге мы ввели в общей сложности 1170 доз вакцины против COVID от Pfizer», — сказал главный медицинский директор KRH д-р.— сказал Дуг Нельсон.
Он говорит, что первый раунд вакцинации в KRH на прошлой неделе прошел максимально гладко.
Вакцины распределялись среди медицинских работников в течение двух дней по электронному расписанию во избежание скопления людей.
Доктор Нельсон говорит, что больница на самом деле получила больше доз вакцины против COVID-19, чем ожидалось изначально.
«Мы должны были получить 975 доз, по пять доз на каждую мерзавку, и оказалось, что в каждой мерзавке действительно шесть доз, поэтому мы использовали лишнее и сделали эти прививки», — сказал доктор. — сказал Нельсон.
«И Управление по санитарному надзору за качеством пищевых продуктов и медикаментов фактически разрешило это делать, поэтому мы чувствуем, что получили небольшой бонус в плане возможности иммунизировать людей», — добавил он.
Доктор Нельсон говорит, что следующая партия вакцины прибудет в больницу в конце этой недели
Он говорит, что второй партией будет вакцина «Модерна», которая, скорее всего, будет распределена среди основных работников через неделю после Рождества
«Полицейский, пожарный, учителя и так далее — не прямая медицинская помощь рабочих, а людей, которые являются важным персоналом для поддержания жизни нашего общества», — говорит доктор.— сказал Нельсон.
Хотя первая раздача вакцины от COVID-19 в округе Флэтхед выглядит многообещающе, доктор Нельсон предупреждает, что граждане должны продолжать следовать рекомендациям по борьбе с COVID-19, чтобы защитить друг друга.
«Мы еще не вышли из этого, у нас есть некоторая надежда, но мы еще не достигли этого, поэтому продолжайте делать то, что, как мы знаем, помогает предотвратить распространение вируса», — сказал доктор Нельсон.
Доктор Нельсон сообщил MTN News, что ни у кого из тех, кто получил первую партию вакцины в Kalispell Regional Healthcare, не было зарегистрировано серьезных побочных эффектов.
Все медицинские работники, получившие вакцину в KRH, находились под наблюдением в течение 15 минут после вакцинации.
Что означает KRH? Бесплатный словарь
Вкратце, после этапа реактивации синаптосомы осаждали, как описано ранее, ресуспендировали в 300 мкл смеси 1:1 с использованием KRH и проникающего в клетку флуорофора Fluo-4 (Fluo-4 Direct™ Calcium Assay, Life Technologies) Поглощение глюкозы определяли добавлением буфера START 10X (1 мкКи 2-дезокси-D-[2, [6-.sup.3]H)-глюкоза в буфере KRH). Департамент экологии и управления природными ресурсами, Университет штата Оклахома, Стилуотер, OK 74078 (KRH, SDF). 20 основных боевых танков Challenger 2 и проводили боевые сценарии вместе со своими польскими аналогами. Где [k.sub.ra] и krh ([k.sub.[theta]0] и [k.sub.[theta]1]) константы поступательной пружины, а [K. sub.ra] и [K.sub.rb] ([k.sub.[theta]0] и [k.sub.[theta]i]) — константы вращательной пружины при r = a и b ([тета] = 0 и [фи]) соответственно.Ткани транспортировали из операционной в лабораторию в стерильном буфере KRH с пенициллином (100 ЕД/мл) и стрептомицином (100 мкг/мл). Часть каждого образца свежей ткани расщепляли коллагеназой I типа в Кребс- Буфер Рингера-Хенселейта (KRH) в соответствии с модифицированной версией метода Родбелла [34]. KRH LLC, 505-A Grant Road, East Wenatchee; стоимость не указана для знака Папы Мерфи. (8.) Shivabasavaiah KRH, Pavana T, Ramyashree M, Ramya MC, Manjunath R.PFE Rolls, ранее KRH Rolls и ранее подразделение Penna-Flex Roller Technology, специализируется на проектировании и производстве роликов. используется в бумажной, пластмассовой, химической и пищевой промышленности.Наилучшее приближение к вероятности положительного ответа на первый пункт KRH (RH> = 44) было выбрано из класса функций двух отрезков парабол (6), где a = 0,53, b = 0,75. Так он утверждает в Афоризмах Гражданин, что есть справедливая война (харб), которая «приведёт и принудит (ва-ястакриху) людей к тому, что лучше и удачнее для них самих, отдельно от других, когда они сами не знают этого и не покоряются тем, кто узнай это и пригласи их к этому». (57) Глагол «принуждать» (ястакриху) здесь происходит от того же корня (крх), который используется в «Достижении счастья» для описания этического формирования нежелающего «по принуждению» (курхан), и, следовательно, князь должен иметь « мощнейшее умение для формирования своего характера по принуждению» (курхан).Академия KRH в App Store
Разработчик, Epignosis LLC, указал, что политика конфиденциальности приложения может включать обработку данных, как описано ниже. Для получения дополнительной информации см. политику конфиденциальности разработчика.
Данные, связанные с вами
Следующие данные могут быть собраны и связаны с вашей личностью:
- Место расположения
- Контактная информация
- Пользовательский контент
- Идентификаторы
- Диагностика
Данные не связаны с вами
Могут быть собраны следующие данные, но они не связаны с вашей личностью:
- История поиска
- Данные об использовании
- Другие данные
Методы обеспечения конфиденциальности могут различаться, например, в зависимости от используемых вами функций или вашего возраста.