Газ 3221 размеры: Микроавтобус ГАЗ-3221 (ГАЗель) технические характеристики, обзор и фотографии

Микроавтобус ГАЗ-3221 (ГАЗель) технические характеристики, обзор и фотографии

Модель ГАЗ-3221 – первый пассажирский микроавтобус семейства «ГАЗель», вышедший на российский рынок. Именно этот автомобиль чаще всего использовался в качестве маршрутных такси до появления специализированных, более вместительных версий «ГАЗели». Непосредственно ГАЗ-3221 ориентирован, прежде всего, на использование в качестве экскурсионного автомобиля для перевозки небольших туристических групп или же в качестве служебного микроавтобуса для доставки персонала к месту работы.

Минивэн «ГАЗель» ГАЗ-3221 первого поколения построен на базе фургона ГАЗ-2705, что хорошо прослеживается по контурам автомобиля. Между тем, ГАЗ-3221, в отличие от фургона, снабжен остеклением по всему контуру кузова со сдвижными форточками, а также четырьмя дверями – две спереди, одна сдвижная по правому борту и задняя распашная, открывающаяся на 180 градусов. Дизайн ГАЗ-3221 ничем примечательным не выделяется и выполнен по привычным канонам «ГАЗели».

Рестайлинг ГАЗ-3221 проходил одновременно с остальными моделями, так что микроавтобус получил и свежую решетку радиатора, и каплевидные фары, и крупные боковые зеркала.

Салон ГАЗ-3221 разделен на две части низкой перегородкой. Спереди располагается место водителя и пассажирское кресло, рассчитанное на одного седока (возможна опциональная установка двухместного пассажирского кресла). Задняя часть салона может иметь как 6-ти, так и 7-местную компоновку. Таким образом, общая вместимость микроавтобуса составляет 8 или 9 человек с учетом водителя. В некоторых вариантах комплектации салон дополняется откидным столиком (ГАЗ-32212) для бумажной работы в пути, а часть выпущенных микроавтобусов получила высокую крышу (высота салона – 1850 мм) и комфортабельные кресла с подголовниками и подлокотниками. За последним рядом кресел предусмотрено багажное пространство, способное «проглотить» до 250 литров груза.

Длина микроавтобуса ГАЗ-3221 составляет 5520 мм. Колесная база автомобиля равна 2900 мм. На передний свес производитель отвел 990 мм, на задний свес приходится 1610 мм. Ширина кузова ГАЗ-3221 составляет 1966 мм, габаритная ширина микроавтобуса с учетом зеркал достигает отметки 2500 мм. Высота автомобиля со стандартным салоном равна 2200 мм. Версия с высокой крышей вытягивается до 2274 мм. Колея передних и задних колес соответственно равна 1700 и 1560 мм. Высота дорожного просвета микроавтобуса ГАЗ-3221 – 170 мм.

Снаряженная масса микроавтобуса ГАЗ-3221 составляет 2500 кг. В свою очередь полная масса автомобиля достигает отметки 3250 кг. При этом отметим, что допустимая конструкцией нагрузка на переднюю ось не должна превышать 1155 кг, а на заднюю – не выходить за рамки 2095 кг.

Технические характеристики. Микроавтобус «ГАЗель» ГАЗ-3221 получил тот же набор бензиновых и дизельных двигателей, что и фургон ГАЗ-2705. Для модификаций 3221-404, 3221-408 и полноприводной версии 32217-408 производитель выбрал 4-цилиндровый рядный бензиновый атмосферный агрегат марки ЗМЗ-40524, имеющий в своем распоряжении 2,46 литра рабочего объема и способный развивать до 133 л.

с. максимальной мощности при 4500 об/минуту, а также 214 Нм крутящего момента при 4000 об/минуту.

Модификации 3221-531 достался 4-цилиндровый дизельный мотор ГАЗ-5602 (STEYR M14) с рабочим объемом 2,13 литра. Этот двигатель комплектовался системой турбонаддува и, в зависимости от степени форсировки, производил 95 или 110 л.с. мощности. Крутящий момент мотора соответственно составлял 204 Нм при 2300 об/минуту и 250 Нм при 2000 об/минуту.

Американский мотор Chrysler 2.4L-DOHC производитель устанавливал на модификацию 3221-748. Данный агрегат, снабженный 4-мя цилиндрами с общим рабочим объемом 2,43 литра, 16-клапанным ГРМ DOHC и системой распределенного впрыска топлива, выдавал до 150 л.с. максимальной мощности при 5500 об/минуту, а его пиковый крутящий момент достигал отметки в 224 Нм уже при 4200 об/минуту. Некоторые моторы Chrysler 2.4L-DOHC устанавливались в «усеченном» варианте с отдачей 133 л.с. и крутящим моментом 204 Нм.

Добавим, что в разные периоды выпуска ГАЗ-3221 мог комплектоваться и другими моторами, в частности ЗМЗ-4025. 10, ЗМЗ-4026.10, ЗМЗ-4061.10, ЗМЗ-4063.10, УМЗ-4215.10-30 и УМЗ-4215.10 мощность от 89 до 110 л.с. Все двигатели для «ГАЗель» ГАЗ-3221 работали в паре с 5-ступенчатой трехвальной синхронизированной «механикой» с передаточным числом главной передачи 5,125. С двигателем КПП взаимодействовала через фрикционное однодисковое сухое сцепление, имеющее гидравлический привод управления.

Как и прочие автомобиля марки «ГАЗель», микроавтобус ГАЗ-3221 имеет зависимую рессорную подвеску спереди и сзади, которая дополняется гидравлическими телескопическими амортизаторами, а также стабилизатором поперечной устойчивости на задней оси. Большая часть модификаций ГАЗ-3221 имеет задний привод, но версия 32217-408 снабжена системой постоянного полного привода на основе межосевого дифференциала, подключающего переднюю ось. Тормозная система микроавтобуса ГАЗ-3221 имеет два контура, гидравлический привод управления и стандартный вакуумный усилитель. На передних колесах производитель использовал дисковые тормозные механизмы, задние колеса снабжены барабанными тормозами.

Рулевой механизм работает по принципу «винт – шариковая гайка». С 2005 года все версии ГАЗ-3221 уже в базе оснащаются системой ABS. Также в базовое оснащение микроавтобуса входит гидроусилитель руля. Выпуск микроавтобуса ГАЗ-3221 первого поколения был завершен в 2010 году.

Отзывы

Школьный автобус ГАЗ-3221 12 мест ГАЗель БИЗНЕС

Школьный автобус ГАЗ-3221 12 мест ГАЗель БИЗНЕС — ГАЗ-Восточный Ветер

Главная » Модельный ряд ГАЗ » Газель БИЗНЕС » Школьный автобус ГАЗ-3221 12 мест ГАЗель БИЗНЕС

Микроавтобус ГАЗ 3221 «Школьный автобус» для перевозки детей. Выпускается с двигателями: бензиновым «УМЗ» и и дизельным «Cummins», с приводами 4х2 и 4х4, число мест 11+1. Все автобусы в базовой комплектации оборудованы ГУР, АБС. Автобус снаружи окрашен в ярко-желтый цвет, с нанесением специальной цветографической схемы.

Микроавтобус ГАЗель БИЗНЕС, рассчитанный на 12 пассажирских мест, маневренно перемещаясь по городу, быстро доезжает до пункта назначения. Мягкие кресла, расположенные по ходу движения, могут быть оборудованы подголовником и подлокотниками. Для междугородних маршрутов необходимо обеспечить каждое пассажирское сиденье ремнями безопасности, что регламентировано правилами междугородних пассажироперевозок.  Остекление салона по периметру создает ощущение увеличенного пространства. Вход-выход пассажиров производится через боковую сдвижную дверь, задние распашные двери используются в качестве запасного выхода.

	БИЗНЕС микроавтобус со средней крышей 8 мест	БИЗНЕС микроавтобус со средней крышей 12 мест	БИЗНЕС микроавтобус с низкой крышей 13 мест	БИЗНЕС микроавтобус с высокой крышей 13 мест	БИЗНЕС микроавтобус с низкой крышей 14 мест	БИЗНЕС микроавтобус с высокой крышей 14 мест
Габаритные размеры: длина/ширина/высота, мм	5475/2075/2200	5475/2075/2200	5475/2075/2200	5475/2075/2600	5475/2075/2200	5475/2075/2600
Внутренние габаритные размеры грузовой платформы (длина/ширина/высота), мм	3140/1830/1500	3140/1830/1500	3140/1830/1500	3140/1830/1900	3140/1830/1500	3140/1830/1900
Пассажировместимость, чел.	1+8	1+12	1+13	1+13	1+14	1+14
Возможность полноприводного исполнения	да	нет	нет	нет	нет	нет

	Cummins ISF2.8s4129P	УМЗ-42164 бензиновый	УМЗ-421647 с LPG Битопливный (бензин+пропан)
Количество цилиндров	4	4	4
Система питания	Common Rail Bosch	многоточечный впрыск топлива	инжекторный впрыск
Рабочий объем, куб. см	2800	2890	2890
Номинальная мощность нетто, кВТ, (л.с.)	88,3 (120)	78,5 (106,8)	73,4 (99,8) при работе на бензине 73,4 (99,8) при работе на сжиженном нефтяном газе

Возможные опции:

• Блокируемый дифференциал (входит в базовую комплектацию)
• Панель прибoров «Люкс»
• Кондиционер
• Тормозная система с АБС
• Пакет опций №2

В состав пакета опций №2 входит: противотуманные фары, электрокорректор зеркал, передние электростеклоподъемники, панель приборов «Люкс» (магнитола с кнопками управления на руле и аудиоподготовка), центральный замок передних дверей

ГДЕ КУПИТЬ МИКРОАВТОБУС 12 МЕСТ

Купить микроавтобус с низкой и высокой крышей, рассчитанный на 12 пассажирских мест (1+12) Вы можете в автосалоне «Восточный Ветер».

×

Сохраняем данные

Мы Вам обязательно перезвоним!

Ой… Программисты что-то сломали 🙁 Попробуйте чуть попозже!

×

Мы уже набираем Ваш номер!

Ой… Программисты что-то сломали 🙁 Они скоро починят, а пока Вы можете сами набрать нас!

×

Вы были у нас на сайте .
Вы нашли то, что искали?

Размеры кузова GAZ 3221 — Таблицы размеров

2.1 л., Дизельный, Механика, 5ст., Задний
Длина	5500 (мм)
Ширина	2075 (мм)
Высота	2200 (мм) (мм)
Колесная база	2900 (мм)
Колея передняя	1700 (мм)
Колея задняя	1560 (мм)
Дорожный просвет	170 (мм)
Длина	3100 (мм)
Ширина	1840 (мм)
Высота	1535 (мм) (мм)
2. 3 л., Бензиновый, Механика, 5ст., Задний
Длина	5500 (мм)
Ширина	2075 (мм)
Высота	2200 (мм) (мм)
Колесная база	2900 (мм)
Колея передняя	1700 (мм)
Колея задняя	1560 (мм)
Дорожный просвет	170 (мм)
Длина	2000 (мм)
Ширина	1840 (мм)
Высота	1535 (мм) (мм)
2.4 л., Бензиновый, Механика, 5ст., Задний
Длина	5500 (мм)
Ширина	2075 (мм)
Высота	2200 (мм) (мм)
Колесная база	2900 (мм)
Колея передняя	1700 (мм)
Колея задняя	1560 (мм)
Дорожный просвет	170 (мм)
Длина	2000 (мм)
Ширина	1840 (мм)
Высота	1535 (мм) (мм)
2. 9 л., Бензиновый, Механика, 5ст., Задний
Длина	5500 (мм)
Ширина	2075 (мм)
Высота	2200 (мм) (мм)
Колесная база	2900 (мм)
Колея передняя	1700 (мм)
Колея задняя	1560 (мм)
Дорожный просвет	170 (мм)
Длина	2000 (мм)
Ширина	1840 (мм)
Высота	1535 (мм) (мм)
2.1 л., Дизельный, Механика, 5ст., Полный
Длина	5480 (мм)
Ширина	1998 (мм)
Высота	2120 (мм) (мм)
Колесная база	2900 (мм)
Колея передняя	1720 (мм)
Колея задняя	1560 (мм)
Дорожный просвет	190 (мм)
Длина	3056 (мм)
Ширина	1978 (мм)
Высота	380 (мм) (мм)
2. 5 л., Бензиновый, Механика, 5ст., Задний
Длина	6616 (мм)
Ширина	1998 (мм)
Высота	2120 (мм) (мм)
Колесная база	3500 (мм)
Колея передняя	1700 (мм)
Колея задняя	1560 (мм)
Дорожный просвет	170 (мм)
Длина	4166 (мм)
Ширина	1978 (мм)
Высота	380 (мм) (мм)
2.5 л., Бензиновый, Механика, 5ст., Полный
Длина	5480 (мм)
Ширина	1998 (мм)
Высота	2120 (мм) (мм)
Колесная база	2900 (мм)
Колея передняя	1720 (мм)
Колея задняя	1560 (мм)
Дорожный просвет	190 (мм)
Длина	3056 (мм)
Ширина	1978 (мм)
Высота	380 (мм) (мм)
2. 4 л., Бензиновый, Механика, 5ст., Полный
Длина	5540 (мм)
Ширина	2075 (мм)
Высота	2300 (мм) (мм)
Колесная база	2900 (мм)
Колея передняя	1720 (мм)
Колея задняя	1560 (мм)
Дорожный просвет	190 (мм)
2.9 л., Бензиновый, Механика, 5ст., Полный
Длина	5540 (мм)
Ширина	2075 (мм)
Высота	2300 (мм) (мм)
Колесная база	2900 (мм)
Колея передняя	1720 (мм)
Колея задняя	1560 (мм)
Дорожный просвет	190 (мм)
2. 8 л., Дизельный, Механика, 5ст., Задний
Длина	5540 (мм)
Ширина	2066 (мм)
Высота	2120 (мм) (мм)
Колесная база	2900 (мм)
Колея передняя	1700 (мм)
Колея задняя	1560 (мм)
Дорожный просвет	170 (мм)
Длина	3089 (мм)
Ширина	1978 (мм)
Высота	400 (мм) (мм)
2.8 л., Дизельный, Механика, 5ст., Полный
Длина	5540 (мм)
Ширина	2066 (мм)
Высота	2210 (мм) (мм)
Колесная база	2900 (мм)
Колея передняя	1720 (мм)
Колея задняя	1560 (мм)
Дорожный просвет	190 (мм)
Длина	3089 (мм)
Ширина	1978 (мм)
Высота	400 (мм) (мм)
2. 9 л., Бензиновый, Механика, 5ст., Задний
Длина	5540 (мм)
Ширина	2066 (мм)
Высота	2120 (мм) (мм)
Колесная база	2900 (мм)
Колея передняя	1700 (мм)
Колея задняя	1560 (мм)
Дорожный просвет	170 (мм)
Длина	3089 (мм)
Ширина	1978 (мм)
Высота	400 (мм) (мм)
2.9 л., Бензиновый, Газ, Механика, 5ст., Задний
Длина	5540 (мм)
Ширина	2066 (мм)
Высота	2120 (мм) (мм)
Колесная база	2900 (мм)
Колея передняя	1700 (мм)
Колея задняя	1560 (мм)
Дорожный просвет	170 (мм)
Длина	3089 (мм)
Ширина	1978 (мм)
Высота	400 (мм) (мм)
2. 9 л., Бензиновый, Механика, 5ст., Полный
Длина	5540 (мм)
Ширина	2066 (мм)
Высота	2210 (мм) (мм)
Колесная база	2900 (мм)
Колея передняя	1720 (мм)
Колея задняя	1560 (мм)
Дорожный просвет	190 (мм)
Длина	3089 (мм)
Ширина	1 978 (мм)
Высота	400 (мм) (мм)

Turbo Встраиваемый газовый гриль с 4 горелками

БЕСПЛАТНАЯ ДОСТАВКА ТЫСЯЧ ТОВАРОВ! *

Обратите внимание на БЕСПЛАТНУЮ ДОСТАВКУ на сотнях грилей, обогревателей, огневых столов и многого другого. Чтобы увидеть полный список продуктов, посетите нашу страницу «Бесплатная доставка».

Как быстро будет отправлен мой заказ?

ETA продукта можно найти на каждом отдельном продукте. Товары, которые есть в наличии, обычно отправляются в течение 1-2 рабочих дней. Срок доставки товаров по специальному заказу может составлять от 2 до 12 недель или дольше, в зависимости от продукта и наличия.Указанное время является приблизительным и может быть изменено в любое время. Если у вас есть вопросы о конкретном продукте или о сроках доставки для уже размещенного заказа, обратитесь в службу поддержки клиентов по телефону 1-800-GRILL-UP.

В связи с текущей глобальной пандемией Covid-19 время доставки и доступность продукта сильно колеблются и не могут быть гарантированы. Наличие на складе и время доставки могут быть разными и могут быстро меняться. Если у вас есть какие-либо вопросы, свяжитесь с нашей службой поддержки клиентов.

Сколько времени займет получение моего заказа?

Время доставки рассчитывается на основе даты отгрузки, а не даты заказа. Заказы отправляются через 1-2 рабочих дня после даты заказа для заказов на складе или через 1-2 рабочих дня после получения всех отдельных продуктов по заказам с продуктами специального заказа. FedEx / UPS не осуществляет доставку по выходным и не учитывает эти дни при факторинге доставки. Таким образом, заказы, отправленные в четверг или пятницу, могут быть доставлены в понедельник и вторник соответственно.Сроки доставки также зависят от местонахождения клиента. Обычно время доставки составляет от 1 до 5 рабочих дней.

Для заказов на перевозку грузовой перевозчик свяжется с клиентом по номеру телефона, указанному в заказе, чтобы назначить встречу с доставкой. Если грузовой перевозчик не может вовремя связаться с клиентом, чтобы назначить встречу, это повлияет на сроки доставки. Пожалуйста, включите в свой заказ действующий и легко доступный номер телефона, чтобы избежать ненужных задержек.Если с клиентом не удается связаться в течение 48 часов с момента первой попытки связаться со службой доставки, заказ клиента будет возвращен в Barbeques Galore. Затем покупателю будет возвращена первоначальная покупная цена заказа, за вычетом затрат на доставку и 15% комиссионных за возврат.

С кем я могу связаться, если у меня возникнут дополнительные вопросы?

Свяжитесь с нами через чат, свяжитесь с нами по телефону 1-800-GRILL-UP (8: 30A-4: 30P M-F) или поговорите с одним из наших экспертов по грилю в вашем местном магазине Barbeques Galore, чтобы узнать больше!

Важная информация для заказов на фрахт

Заказы на фрахт — это заказы, которые либо слишком тяжелы, либо слишком велики по размерам для обычных отправлений FedEx / UPS.Для всех грузовых перевозок потребуется доступ для доставки полуприцепа и прицепа. Если это вызывает беспокойство в вашем регионе, свяжитесь с нашей службой поддержки клиентов, и мы будем рады обсудить это с транспортной компанией перед покупкой товара.

Чего ожидать от заказов на фрахт

1. Как только ваш заказ будет размещен и ваш товар будет у нас на складе, транспортная компания свяжется с вами, чтобы назначить время возврата.
2. Вы должны будете присутствовать при физическом заражении и подписать свой заказ.
3. Грузовик с подъемными воротами разгрузит продукт по краю.Если заранее не были согласованы другие условия, они не могут доставить посылку в другое место.
4. Пожалуйста, осмотрите свой продукт, прежде чем подписывать квитанцию ​​о доставке (POD).
5. Если есть повреждение, сделайте снимок, сразу откажитесь от доставки и свяжитесь со службой поддержки клиентов по электронной почте, чтобы мы могли решить проблему.
6. После подписания документа, подтверждающего доставку, вы принимаете право собственности на товары в их текущем состоянии

Турбо 4-х горелочный встроенный газовый гриль

БЕСПЛАТНАЯ ДОСТАВКА ТЫСЯЧ ТОВАРОВ! *

Обратите внимание на БЕСПЛАТНУЮ ДОСТАВКУ на сотнях грилей, обогревателей, огневых столов и многого другого.Чтобы увидеть полный список продуктов, посетите нашу страницу «Бесплатная доставка».

Как быстро будет отправлен мой заказ?

ETA продукта можно найти на каждом отдельном продукте. Товары, которые есть в наличии, обычно отправляются в течение 1-2 рабочих дней. Срок доставки товаров по специальному заказу может составлять от 2 до 12 недель или дольше, в зависимости от продукта и наличия. Указанное время является приблизительным и может быть изменено в любое время. Если у вас есть вопросы о конкретном продукте или о сроках доставки для уже размещенного заказа, обратитесь в службу поддержки клиентов по телефону 1-800-GRILL-UP.

В связи с текущей глобальной пандемией Covid-19 время доставки и доступность продукта сильно колеблются и не могут быть гарантированы. Наличие на складе и время доставки могут быть разными и могут быстро меняться. Если у вас есть какие-либо вопросы, свяжитесь с нашей службой поддержки клиентов.

Сколько времени займет получение моего заказа?

Время доставки рассчитывается на основе даты отгрузки, а не даты заказа. Заказы отправляются через 1-2 рабочих дня после даты заказа для заказов на складе или через 1-2 рабочих дня после получения всех отдельных продуктов по заказам с продуктами специального заказа. FedEx / UPS не осуществляет доставку по выходным и не учитывает эти дни при факторинге доставки. Таким образом, заказы, отправленные в четверг или пятницу, могут быть доставлены в понедельник и вторник соответственно. Сроки доставки также зависят от местонахождения клиента. Обычно время доставки составляет от 1 до 5 рабочих дней.

Для заказов на перевозку грузовой перевозчик свяжется с клиентом по номеру телефона, указанному в заказе, чтобы назначить встречу с доставкой. Если грузовой перевозчик не может вовремя связаться с клиентом, чтобы назначить встречу, это повлияет на сроки доставки.Пожалуйста, включите в свой заказ действующий и легко доступный номер телефона, чтобы избежать ненужных задержек. Если с клиентом не удается связаться в течение 48 часов с момента первой попытки связаться со службой доставки, заказ клиента будет возвращен в Barbeques Galore. Затем покупателю будет возвращена первоначальная покупная цена заказа, за вычетом затрат на доставку и 15% комиссионных за возврат.

С кем я могу связаться, если у меня возникнут дополнительные вопросы?

Свяжитесь с нами через чат, свяжитесь с нами по телефону 1-800-GRILL-UP (8: 30A-4: 30P M-F) или поговорите с одним из наших экспертов по грилю в вашем местном магазине Barbeques Galore, чтобы узнать больше!

Важная информация для заказов на фрахт

Заказы на фрахт — это заказы, которые либо слишком тяжелы, либо слишком велики по размерам для обычных отправлений FedEx / UPS.Для всех грузовых перевозок потребуется доступ для доставки полуприцепа и прицепа. Если это вызывает беспокойство в вашем регионе, свяжитесь с нашей службой поддержки клиентов, и мы будем рады обсудить это с транспортной компанией перед покупкой товара.

Чего ожидать от заказов на фрахт

1. Как только ваш заказ будет размещен и ваш товар будет у нас на складе, транспортная компания свяжется с вами, чтобы назначить время возврата.
2. Вы должны будете присутствовать при физическом заражении и подписать свой заказ.
3. Грузовик с подъемными воротами разгрузит продукт по краю.Если заранее не были согласованы другие условия, они не могут доставить посылку в другое место.
4. Пожалуйста, осмотрите свой продукт, прежде чем подписывать квитанцию ​​о доставке (POD).
5. Если есть повреждение, сделайте снимок, сразу откажитесь от доставки и свяжитесь со службой поддержки клиентов по электронной почте, чтобы мы могли решить проблему.
6. После подписания документа, подтверждающего доставку, вы принимаете право собственности на товары в их текущем состоянии

BG — Взаимосвязи — Пространственная изменчивость pCO2 в поверхностных водах и газообмен в крупнейшей в мире полузамкнутой эстуарной системе: St.Устье Лоуренса (Канада)

Океанографическая экспедиция МАЛИНА: как изменения ледяного покрова, вечной мерзлоты и УФ-излучения влияют на биоразнообразие и биогеохимические потоки в Северном Ледовитом океане?

Филипп Массикотт, Райнер М. В. Амон, Давид Антуан, Филипп Аршамбо, Серхио Бальзано, Симон Беланже, Рональд Беннер, Доминик Бёф, Анник Брико, Флавьен Бруян, Гвенаэль Шайю, Малик Шами, Бруно Шареньер, Эрв Клэпель, Эрв Клэпель, Жинг Клэпель Николь Делсаут, Давид Доксаран, Йенс Эн, Седрик Фишо, Мари-Элен Форгет, Пинцин Фу, Джонатан Ганьон, Николь Гарсиа, Бит Гассер, Жан-Франсуа Гильоне, Габи Горски, Мишель Госселен, Присциллия Гурвиль, Пингвин Гурвиль, Пингвин Фу Дж.Хейпипер, Серж Хойсснер, Стэнфорд Б. Хукер, Янник Хуот, Кристиан Жантон, Уэйд Джеффри, Фабьен Жу, Кимитака Кавамура, Бруно Лансар, Эдуард Леймари, Хайке Линк, Конни Лавджой, Клоди Марек, Доминик Мари, Йоханни Мартин, Жакобо Мартин, Жакобо Мартин Массе, Ацуши Мацуока, Ванесса МакКаг, Александр Миньо, Уильям Л. Миллер, Хуан-Карлос Микель, Альфонсо Муччи, Каори Оно, Ева Ортега-Ретуэрта, Христос Панагиотопулос, Тим Папакириаку, Марк Пичераль, Луи Приер, Патрик Раймбо Рик А.Рейнольдс, Андре Рошон, Жан-Франсуа Ронтани, Катрин Шмехтиг, Сабина Шмидт, Ришар Семпере, Юань Шен, Гишенг Сон, Дариуш Страмски, Эри Тачибана, Александр Тируар, Имма Толоса, Жан-Эрик Трембле, Микаэтильоэль Вара , Джон К. Фолькман, Хуэйсян Се, Гуанмин Чжэн и Марсель Бабин

Earth Syst. Sci. Данные, 13, 1561–1592, https://doi.org/10.5194/essd-13-1561-2021, https://doi.org/10.5194/essd-13-1561-2021, 2021

Краткое содержание

3221 Burke Dr, Royse City, TX, 75189

Совершенно новый энергоэффективный дом готов к декабрю 2021 года! Allen предлагает красивую планировку открытой планировки с большим уединенным основным люксом.Белые шкафы с дымчато-серыми гранитными столешницами, пол из серой плитки под известняк и текстурированный ковер в нашем пакете Cool. Проведите выходные в общественном бассейне, пообщайтесь с соседями или исследуйте близлежащие пешеходные тропы. Легкий доступ к сообществу прямо с FM 35 позволяет легко добраться домой. Наши дома, известные своей энергоэффективностью, помогут вам вести более здоровый и спокойный образ жизни, сэкономив тысячи долларов на счетах за коммунальные услуги.

Характеристики объекта

Спальни

• Спальни: 4
• Размеры главной спальни: 15 x 14
• Размеры спальни 1: 11 x 10
• Размеры спальни 2: 11 x 10
• Размеры спальни 3: 10 x 11
• Спальня 4 Размеры: 11 x 10
• Уровень главной спальни: 1
• Спальня 1 Уровень: 1
• Спальня 2 Уровень: 1
• Спальня 3 Уровень: 1
• Спальня 4 Уровень: 1

Другие комнаты

• Всего комнат: 7
• Главная спальня, гостиная, спальня, спальня, спальня, спальня, Другое
• Другое: 10 x 10
• Другой уровень: 1
• Размеры гостиной: 18 x 14
• Уровень гостиной: 1

Ванные комнаты

• Всего ванных комнат: 2.00
• Полные ванные комнаты: 2

Внутренние элементы

• Система «Умный дом»
• Полы: керамическая плитка, ламинат, винил

Отопление и охлаждение

• Элементы отопления: центральная система кондиционирования воздуха, тепловой насос

Внешний вид и особенности участка

Гараж и парковка

• Крытые помещения: 2
• Гаражные места: 2
• Описание гаража: двухкамерные двери на 2 машины
• Функции парковки: Двусторонние двери на 2 машины

Информация о земле

• Размер участка соток: 0.13
• Размер участка Размеры: 50×120
• Размер участка: Акры
• Размер участка Квадратные футы: 5663

Ассоциация домовладельцев

• Ассоциация: Да
• Комиссия ассоциации: 480
• Частота оплаты ассоциации: Ежеквартально
• Ассоциация В сбор входит: Обслуживание мест общего пользования
• Расчетный общий ежемесячный взнос ассоциации: 160

Информация о школе

• Начальная школа: Форт
• Средняя школа: Город Ройс
• Средняя школа: Уида Бейли
• Школьный округ: Город Ройс ISD

Удобства и особенности сообщества

• Функции сообщества: Общий бассейн, беговая дорожка / велосипедная дорожка, парк, детская площадка

Другая информация о собственности

• Статус списка источников: Ожидается
• Округ: Рокволл
• Направления: от I. -30, выезжайте с фермы на Market Rd.2642. и поверните на юг. Продолжайте движение 0,7 мили. На перекрестке FM 35 поверните налево. Продолжайте движение 0,5 мили и поверните направо на Glorioso Drive. Модель будет слева от вас.
• Тип недвижимости источника: SingleFamily
• Район источника: DeBerry Reserve
• Подразделение: DeBerry Reserve
• Подтип собственности: RES-Single Family
• Номер лота: 6
• Название исходной системы: C2C

Строительство и строительство

• Общая площадь Жилая: 1989
• Год постройки: 2021
• Площадь застройки: План здания
• Строительные материалы: Строительство: Кирпич
• Детали фундамента: Плита
• Новое строительство: Да
• Состояние объекта: Новое строительство — Незавершенное
• Крыша: Состав
• Уровни или этажи: 1
• Тип конструкции: Отдельно стоящая
• Стиль дома: Традиционный
• Год постройки Детали: Новое строительство — Незавершенное

Коммунальные услуги

• Коммунальные услуги: Городская канализация, Городская вода

Home Features

• Green Energy Efficient: Energ y Функции экономии: 13-15 SEER AC, приборы Energy Star, программируемый термостат, водонагреватель без резервуара
• Другое оборудование: встроенная микроволновая печь, газовая плита, посудомоечная машина

Узнайте больше об этой собственности.Контактный агент

Brock Supply — 99-00 FD MUSTANG ГАЛОГЕННАЯ КОМБИНАЦИЯ ФАРА В СБОРЕ, ПРАВАЯ

Приложения
1999 г.	Форд	Мустанг
Базовый кабриолет 2-дверный	3.8L 232Cu. В. V6 GAS OHV Безнаддувный
Базовый кабриолет 2-дверный	4.6L 281Cu. В. V8 GAS SOHC Безнаддувный
Базовое купе 2-дверное	3.8L 232Cu. В. V6 GAS OHV Безнаддувный
Базовое купе 2-дверное	4.6L 281Cu. В. V8 GAS SOHC Безнаддувный
GT кабриолет 2-дверный	4.6L 281Cu. В. V8 GAS SOHC Безнаддувный
GT купе 2-дверный	4.6L 281Cu. В. V8 GAS SOHC Безнаддувный
SVT Cobra кабриолет 2-дверный	4.6L 281Cu. В. V8 GAS DOHC Безнаддувный
SVT Cobra Coupe 2-дверный	4.6L 281Cu. В. V8 GAS DOHC Безнаддувный
2000 г.	Форд	Мустанг
Базовый кабриолет 2-дверный	4.6L 281Cu. В. V8 GAS SOHC Безнаддувный
Базовый кабриолет 2-дверный	3.8L 232Cu. В. V6 GAS OHV Безнаддувный
Базовое купе 2-дверное	4.6L 281Cu. В. V8 GAS SOHC Безнаддувный
Базовое купе 2-дверное	3.8L 232Cu. В. V6 GAS OHV Безнаддувный
GT кабриолет 2-дверный	4.6L 281Cu. В. V8 GAS SOHC Безнаддувный
GT купе 2-дверный	4.6L 281Cu. В. V8 GAS SOHC Безнаддувный
SVT Cobra R Coupe 2-дверный	5.4L 330Cu. В. V8 GAS DOHC Безнаддувный

Прямое осаждение образованных газовой фазой аэрозольных наночастиц золота в биологические жидкости

Образец цитирования: Свенссон CR, Мессинг М.Э., Лундквист М., Шоллин А., Депперт К., Пагелс Дж. Х. и др.(2013) Прямое осаждение аэрозольных наночастиц золота, генерируемых газовой фазой, в биологические жидкости — образование короны и изменение размера частиц. PLoS ONE 8 (9): e74702. https://doi.org/10.1371/journal.pone.0074702

Редактор: Салик Хуссейн, Национальный институт здравоохранения (NIH), Соединенные Штаты Америки

Поступила: 29 апреля 2013 г .; Одобрена: 5 августа 2013 г .; Опубликован: 27 сентября 2013 г.

Авторские права: © 2013 Svensson et al.Это статья в открытом доступе, распространяемая в соответствии с условиями лицензии Creative Commons Attribution License, которая разрешает неограниченное использование, распространение и воспроизведение на любом носителе при условии указания автора и источника.

Финансирование: Авторы выражают признательность Forte — Шведскому исследовательскому совету по вопросам здоровья, трудовой жизни и благосостояния, Grant nr. 2009-1291; FORMAS, Грант № 216-2009-1294; ВИННОВА, Грант № 2009-01117; и Консорциум нанометровых структур в Лундском университете за их щедрое финансирование.Финансирующие организации не играли никакой роли в дизайне исследования, сборе и анализе данных, принятии решения о публикации или подготовке рукописи.

Конкурирующие интересы: Авторы заявили об отсутствии конкурирующих интересов.

Введение

По мере увеличения использования промышленных наночастиц (МНЧ) возрастает и риск воздействия. Растет опасение, что наночастицы могут представлять опасность для здоровья человека. Некоторые обычно используемые сегодня MNP основаны на углероде или образованы металлами и оксидами металлов, такими как золото, серебро, цинк [1] ​​- [3] или диоксид титана [4].По мере уменьшения размеров частиц до нанометрового масштаба материалы, не являющиеся токсичными в объемной форме, могут стать токсичными. Таким образом, потребность в токсикологических данных наночастиц больше, чем когда-либо. Однако взаимодействие наночастиц с биологическими системами нетривиально изучить. Знания о том, как наночастицы попадают в организм и как путь воздействия изменяет их возможную токсичность, могут значительно облегчить рентабельные подходы к снижению воздействия наиболее вредных частиц и, таким образом, обеспечить безопасное развитие нанотехнологий в будущем.Примерами путей воздействия являются вдыхание, кожа и глаза, где вдыхание было определено как один из наиболее важных путей воздействия с точки зрения риска для здоровья [5]. Вероятность осаждения вдыхаемых наночастиц в легких как функция диаметра частиц была тщательно изучена для сферических и агломерированных, а также гидрофобных и гидрофильных частиц [6], [7].

Один тип взаимодействия, который, как полагают, имеет отношение к этим наблюдениям, — это взаимодействие между наночастицами и белками.Попав в легкие, наночастицы попадают в биологическую среду и сразу же покрываются белками и другими биомолекулами [8] — [10]. Образованная бимолекулярная корона предположительно является истинной сущностью, которая определяет биологическую судьбу и эффекты наночастиц [11]. Было показано, что частицы с разными характеристиками генерируют разные коронки в различных белковых растворах [12], [13]. Токсикологические исследования показали, что выбор растворенного вещества может играть важную роль в уровне токсичности, которую могут оказывать частицы [14], [15].Это означает, что в конечном итоге частицы могут иметь разные биологические эффекты в зависимости от окружающей среды. Также было показано, что размер, морфология и агрегатное состояние частиц важны для токсикологической реакции частиц [16], [17]. Известно, что на размер и агрегатное состояние твердых частиц в водных растворах влияет корона, образующаяся на поверхности частиц. Таким образом, чтобы понять судьбу частиц при отложении в жидкости слизистой оболочки легких и последующие биологические эффекты, важно понимать формирование короны белка частицы, состояние агрегации и гидродинамический размер.Это также имеет решающее значение при интерпретации наблюдений токсикологических тестов, как in vivo, и in vitro, , при выполнении с использованием жидких суспензий наночастиц и при разработке новых исследований токсикологии частиц.

Было проведено множество экспериментов in vivo и in vitro для изучения вышеупомянутых свойств и их значения для токсикологии вдыхаемых частиц [18], [19]. Чтобы такие тесты давали соответствующие результаты, они должны как можно точнее имитировать реальную ситуацию облучения.По крайней мере, мы должны понимать потенциальный эффект, который вносят отличия от реальной ситуации облучения. Традиционно токсикологические исследования проводились с использованием жидкой суспензии частиц — как in vivo, [20] — [22], так и in vitro, (исследования на культуре погруженных клеток) [23] — [26]. Эти методы экспериментов с полной суспензией с использованием функционализированных наночастиц были подвергнуты сомнению в отношении их физиологической значимости для воздействия через ингаляцию.Могут ли функционализированные наночастицы, введенные в полностью водные клеточные системы, дать надежные токсикологические данные для вдыхаемых наночастиц? Например, покрытие частиц может быть другим, и частицы в суспензии будут полагаться на такие механизмы, как седиментация и броуновская диффузия, чтобы войти в контакт с клетками, прикрепленными к поверхности [27]. Это может, например, внести систематическую ошибку при исследовании токсических эффектов, связанных с размером и площадью поверхности, если не учтено.

Альтернативой традиционной токсикологии является нанесение аэрозольных частиц непосредственно из газовой фазы на поверхность ячейки с использованием камер осаждения на границе раздела воздух-жидкость [23], [27] — [29].Это более точно имитирует ситуацию ингаляционного воздействия. Здесь мы применяем этот принцип для осаждения переносимых по воздуху частиц непосредственно в растворы биомолекул для изучения образования короны, не оказывая влияния на наночастицы со стороны других молекул поверхностно-активного вещества. Таким образом, генерируя чистые частицы без покрытия с хорошо известными характеристиками в газовой фазе с последующим немедленным осаждением, можно преодолеть многие экспериментальные недостатки жидкой суспензии [29], [30].

В этом исследовании используется новая комбинация методов для определения того, как свойства частиц проявляются с точки зрения границы раздела воздух-жидкость.Наночастицы золота без покрытия (AuNP) были получены в газовой фазе методом испарения и конденсации [31]. Они были охарактеризованы в аэрозольной фазе в течение нескольких секунд после их образования с использованием анализатора дифференциальной подвижности (DMA) и анализатора массы аэрозольных частиц (APM) [32], [33], характеризующих AuNP по размеру и массе соответственно. Далее частицы собирали для анализа изображений с помощью просвечивающей электронной микроскопии (ТЕМ). После зарядки наночастицы под действием электростатических сил осаждаются в растворах возрастающей сложности: гомоцистеин, бычий сывороточный альбумин (БСА), сыворотка крови свиньи и легочная жидкость.Система легочной жидкости представляет особый интерес, поскольку одним из основных путей воздействия наночастиц является дыхательная система. Частицы в растворах были охарактеризованы с использованием динамического рассеяния света (DLS), анализа отслеживания частиц (PTA) и УФ-спектроскопии поглощения. Анализ короны белков проводили на AuNP в физиологических растворах, и общая площадь поверхности AuNP была связана с площадью поверхности гомоцистеина / белка в растворе. Соответствующие размерные свойства для диффузионного переноса были измерены как в воздухе (диаметр подвижности) с помощью прямого доступа к памяти, так и в жидком растворе (гидродинамический диаметр) с помощью DLS и PTA.

Результаты и обсуждение

Обзор метода

В данном исследовании мы разрабатываем метод осаждения содержащихся в воздухе AuNP в жидкую фазу. Мы показываем, используя набор методов определения характеристик, что частицы успешно осаждаются в жидкости с различной степенью агрегации и гидродинамическими размерами в зависимости от используемого раствора.

AuNP генерируются и характеризуются размером, массой и формой частиц в воздухе. Генерируются частицы двух типов: 1) сферические с диаметром подвижности 60 нм и 2) агломераты с таким же диаметром подвижности, состоящие из более мелких первичных частиц ∼5–6 нм.Большинство экспериментов проводится с использованием сферических частиц. Частицы заряжаются и осаждаются в различных физиологических жидкостях за счет электростатического осаждения. Обзор экспериментальной процедуры и процедуры генерации показан на рисунках 1 и 2.

Рис. 1. Обзор стратегии генерации и осаждения для исследования.

Частицы образуются в аэрозольной фазе и характеризуются, попадают в камеру осаждения и осаждаются в различных физиологических растворах возрастающей биологической сложности с последующей характеристикой в ​​растворе.

https://doi.org/10.1371/journal.pone.0074702.g001

Рис. 2. Принцип процесса образования частиц, спекания и выбора размера.

1) Испарительная конденсационная печь, образование первичных частиц 5–6 нм. 2) Первичные частицы коагулируют в более крупные агломераты. 3) Печь для спекания, позволяющая производить сферический AuNP. 4) Сферические 60 нм AuNP выбираются из воздушного потока частиц с использованием прямого доступа к памяти. 5) Агломераты AuNP 60 нм выбираются из потока частиц, переносимых по воздуху, с использованием прямого доступа к памяти.

https://doi.org/10.1371/journal.pone.0074702.g002

Образование и характеристика частиц в аэрозольной фазе

На рис. 2 показана концептуальная схема получения агломерата и спеченных AuNP. При нагревании сыпучего материала образуется насыщенный пар металла. При охлаждении пар сразу образует зародыши с последующей конденсацией в так называемые первичные частицы диаметром 5–6 нм. Они, в свою очередь, объединяются в более крупные металлические агломераты за счет коагуляции в газовой фазе.Чтобы сформировать сферические AuNP, агломераты уплотняются в воздухе, этот процесс известен как спекание. Это достигается путем пропускания частиц через трубчатую печь, где частицы подвергаются воздействию температур, близких к температуре плавления, в результате чего первичные частицы агломерата сливаются в по существу сферические формы. Сгенерированные частицы — сферы или агломераты — проходят прямой доступ к памяти, отбирая только частицы одного размера. В нашем исследовании выбранные частицы соответствуют диаметру 60 нм.Следовательно, может быть образован поток либо агломератов, либо спеченных взвешенных в воздухе частиц с одинаковым диаметром подвижности. Таким образом, частицы определенного размера могут быть выбраны и помещены в различные биологические жидкости. Находясь в воздухе, частицы характеризуются размером, массой и формой с последующим осаждением с использованием электростатического осаждения.

На рис. 3A показано распределение частиц по размерам (числовая концентрация частиц как функция размера частиц) сферических AuNP до и после выбора прямым доступом к памяти.Распределение по размерам охарактеризовано с помощью сканирующего измерителя подвижности частиц (SMPS), более подробно описанного в разделе «Материалы и методы». Средства визуализации распространены в области аэрозольных технологий и задаются как dN / dlogDp , где N — числовая концентрация частиц, а D _p — диаметр частицы [34]. Из полученного распределения визуализируется размер фракции, выбранной для осаждения (рис. 3A). Ширина распределения выбранных частиц определяется так называемой передаточной функцией прямого доступа к памяти.На рис. 3B и C показаны изображения, полученные с помощью просвечивающей электронной микроскопии (ПЭМ) выбранных частиц, осажденных на медных решетках с углеродным покрытием.

Рисунок 3. Характеристики бортовой AuNP.

A) Исходное числовое распределение по размерам спеченного аэрозоля AuNP, а также монодисперсных частиц для осаждения в физиологическом растворе (60 нм). Б) Агломераты AuNP 60 нм, визуализированные с помощью просвечивающей электронной микроскопии. C) Спеченные сферические AuNP 60 нм, визуализированные с помощью просвечивающей электронной микроскопии.

https: // doi.org / 10.1371 / journal.pone.0074702.g003

Числовая концентрация 60 нм агломерата AuNP примерно в 2 раза ниже, чем для сферического AuNP. Это происходит из-за более высокой температуры генерации в испарительно-конденсационной печи, необходимой для образования частиц с достаточно большой массой, чтобы после спекания получить частицы размером 60 нм. Агломераты менее плотные, и для создания агломератов 60 нм требуется меньше материала. Масса сферических и агломератных AuNP и плотность частиц определяется с помощью масс-анализатора аэрозольных частиц (APM), работающего после прямого доступа к памяти [33], [35], [36].Сферические AuNP с диаметром подвижности 60 нм и плотностью 16,3 г / см ³ имеют массу приблизительно 1,8 ± 0,037 фг / частица. Сферическая плотность AuNP немного ниже идеальной насыпной плотности золота. Агломераты AuNP с диаметром подвижности 60 нм имеют массу приблизительно 0,6 ± 0,012 фг / частица.

Вероятность осаждения наночастиц в дыхательных путях определяется коэффициентом диффузии частиц в воздухе при переносе в легких (поскольку броуновская диффузия является движущей силой осаждения).Поскольку диаметр подвижности может быть напрямую связан с коэффициентом диффузии частиц в воздухе, сферы и агломераты AuNP с одинаковым диаметром подвижности имеют одинаковую вероятность осаждения в организме человека. Однако масса сферических частиц больше, что приводит к более высоким массовым дозам, даже если осаждаемая числовая концентрация такая же.

Для содержащихся в воздухе AuNP измеренный эквивалентный размер — это диаметр электрической подвижности, эквивалентный размер, определяющий диффузионный перенос наночастиц в воздухе [37].Для AuNP в растворе измерения размеров основаны на гидродинамическом диаметре, за исключением оптической плотности. Гидродинамический диаметр, как и диаметр подвижности, является эквивалентным размером, описывающим коэффициент диффузии частицы. Для физически сферических частиц (как для спеченных AuNP в этом исследовании перед осаждением) диаметр электрической подвижности и гидродинамический диаметр по умолчанию равны истинному физическому диаметру. Оба этих эквивалентных диаметра не зависят от плотности частиц и в основном определяются объемом и морфологией частиц.Для агломератов, состоящих из более мелких слитых первичных частиц, размер представляет собой эквивалентный диаметр сферической частицы, которая имеет такой же коэффициент диффузии, что и агломерат в соответствующих средах (воздух / N ₂ и физиологические жидкости). Из результатов мы находим, что гидродинамический диаметр в жидкостях во всех случаях больше, чем диаметр подвижности в воздухе. Это в первую очередь связано с адсорбцией белка, образующей корону на AuNP.

Осаждение сферических AuNP в физиологических растворах возрастающей сложности

AuNP помещали в буфер 10 мМ NaPO ₄ с 5 мМ гомоцистеином.Гомоцистеин — это встречающаяся в природе небелковая аминокислота. Обоснование использования гомоцистеина заключается в том, что тиоловая группа будет связываться с поверхностью золота ковалентно, а заряженные карбоксильные и аминогруппы будут взаимодействовать с водой и потенциально создавать отталкивание между частицами и тем самым ингибировать агрегацию частиц. Сферические 60 нм AuNP откладываются в гомоцистеиновом буфере, в результате чего концентрация AuNP составляет приблизительно 0,17 ± 0,02 мг / мл. Концентрация оценивается исходя из предположения, что эффективность осаждения составляет 100% [38], для получения дополнительной информации см. Материалы и методы.Z-средний гидродинамический диаметр частиц в растворе гомоцистеина AuNP составляет приблизительно 1300 нм. Результаты показывают, что гомоцистеин не может способствовать образованию индивидуального комплекса AuNP: гомоцистеин в растворе. В образце визуально можно увидеть более крупные чешуйки золота (<мм).

Сферические 60 нм AuNP также осаждаются в БСА с концентрацией 35 мг / мл в 10 мМ NaPO ₄ . Сывороточный альбумин является наиболее распространенным белком в сыворотке крови, и его концентрация в сыворотке составляет примерно 35 мг / мл.Известно, что белки, в том числе альбумин, связывают AuNP в растворе и образуют дискретные комплексы [39] и дезагрегируют некоторые типы наночастиц, образуя более мелкие агрегаты или отдельные частицы [40]. Гипотеза состоит в том, что AuNP без покрытия, помещенные в раствор BSA, будут ассоциироваться с альбумином, что будет препятствовать агрегации частиц. После осаждения наблюдается розовый поверхностный слой, которого не наблюдалось, когда AuNP были нанесены в раствор гомоцистеина. Слой растворяется после многократного дозирования раствора.Известно, что альбумин и другие белки в растворе образуют слой «поверхность-воздух» [41]. Возможно, что AuNP захвачены в поверхностном слое. Эта пленка наблюдается поверх всех биологических жидкостей в исследовании после осаждения сферических AuNP, за исключением гомоцистеина. Предварительные результаты показывают, что слой стабилен с течением времени (дни) и что AuNP не диффундируют в окружающий раствор. Расчетная концентрация AuNP в растворе BSA после осаждения составляет 11,7 ± 0,5 мкг / мл, дополнительную информацию см. В материалах и методах.AuNP в полученном растворе охарактеризованы измерениями УФ-поглощения от 500 до 600 нм (рис. 4). Фон поглощения физиологических жидкостей вычитается перед измерениями. После вычитания оптической плотности раствора BSA без AuNP наблюдается пик оптической плотности приблизительно при 540 нм. Это ожидаемый пик длины волны от плазмонного поглощения сферических частиц золота диаметром 60 нм [42], который соответствует размеру нанесенного сферического AuNP, что позволяет предположить, что частицы золота монодисперсны в растворе.Это, вместе с наблюдением розового поверхностного слоя, предполагает, что осажденные AuNPs сформировали комплексы AuNP: Protein, а не комплексы AuNP: AuNP в растворе.

Размер комплексов AuNP: BSA измеряется с помощью PTA (рис. 5A и таблица 1). Перед измерениями образец AuNP разбавляют в 100 раз водой MQ. Это сделано для уменьшения вязкости образца. Комплексы AuNP: BSA показывают пик, соответствующий гидродинамическому диаметру 80 ± 3 нм. Эксперименты показывают, что альбумин можно представить в виде прямоугольной структуры примерно 8.0 нм · 7,3 нм, с точки зрения поперечного сечения [43]. Следовательно, монослой альбумина на поверхности AuNP будет увеличивать диаметр примерно на 14,6–16,0 нм., В зависимости от конформации белка на поверхности AuNP. Добавляя эти значения к размеру осажденных AuNP, также принимая ± 10% от размера частиц AuNP. Принимая во внимание, теоретический диаметр комплекса AuNP: BSA может быть оценен в растворе как 69–81 нм, принимая среднее значение двух конформационных состояний альбумина. Измеренный комплексный диаметр, измеренный с помощью PTA, находился в пределах теоретически ожидаемого гидродинамического диаметра.

Рис. 5. Распределение размеров AuNP после осаждения в биологические жидкости, пунктирная линия представляет фракцию аэрозоля AuNP, выбранную для осаждения.

A) PTA-измерение AuNP в растворе BSA. B) Измерения DLS AuNP в растворе BSA при трех различных уровнях разведения в буфере BSA. C) Измерения PTA для AuNP в 100% сыворотке, 10% сыворотке и буфере BSA. D) Измерения DLS для AuNP в 100% сыворотке, 10% сыворотке и BSA. Распределения DLS на рисунке взвешены по интенсивности.

https://doi.org/10.1371/journal.pone.0074702.g005

В дополнение к PTA, размер AuNP анализируется с помощью DLS (рисунок 5B). Раствор комплексов AuNP: BSA разбавляют чистым BSA в растворе PBS до 1,17 и 0,117 мкг / мл, эффективно снижая соотношение AuNP к BSA более чем на два порядка. Это было выполнено для обнаружения какой-либо зависимости от концентрации в измеренном размере комплекса AuNP: BSA. Сигнатура интенсивности размера для всех разведений показывает при анализе распределения два различных пика (рис. 5B).Один пик представляет собой размер 7-8 нм, что хорошо соответствует ожидаемому гидродинамическому диаметру БСА. Другой пик представляет собой комплекс AuNP: BSA. Соотношение между BSA и комплексом AuNP: BSA изменяется при разбавлении AuNP буфером BSA, как и следовало ожидать. Для максимальной концентрации доминирует пик комплекса AuNP: BSA; для промежуточной концентрации пики аналогичны; и для самой низкой концентрации комплекса AuNP: BSA преобладает пик BSA. Средние размеры пиков комплекса AuNP: BSA составляют 109 ± 7, 145 ± 22 и 156 ± 112 нм для гидродинамических диаметров для 100%, 10% и 1% концентраций AuNP соответственно (таблица).Высокое стандартное отклонение для случая 1% в первую очередь связано с одним измерением, если убрать стандартное отклонение, падение до 18 нм.

Ожидается увеличение размера частиц с увеличением их разбавления. Это связано с тем, что в растворах с высокой концентрацией частицы имеют тенденцию из-за столкновений и электростатического отталкивания иметь несколько более высокие скорости диффузии. Это дает эффект, заключающийся в том, что размер частиц может быть недооценен в растворах с самой высокой концентрацией частиц. Из-за высокой степени разбавления перед измерениями эта проблема, скорее всего, незначительна в PTA.Гидродинамический размер AuNP: BSA находится в том же диапазоне размеров, что и в предыдущих отчетах. Цитратные AuNP размером 60 нм в сывороточном альбумине человека имели гидродинамический диаметр 107 нм по данным DLS [44]. Для сравнения, другое исследование показывает, что 60 нм AuNP, блокированные цитратом, смешанные с BSA, имели гидродинамический диаметр примерно 70 нм по данным DLS [45]. Неопределенность, связанная с гидродинамическими диаметрами PTA и DLS, представлена ​​в таблице 1.

Размеры, полученные DLS, больше, чем PTA. Разницу между измеренными размерами PTA и DLS можно объяснить разными принципами измерения.С помощью PTA отслеживается рассеянный свет от отдельных частиц. С помощью метода DLS получаются световые помехи от совокупности частиц разных размеров, из которых делается вывод о гидродинамическом распределении по размерам. С увеличением размера частиц их относительное сечение светорассеяния резко увеличивается. Это означает, что небольшая часть более крупных агрегатов, едва видимая при анализе PTA, может иметь большое влияние на анализ DLS (вес ∼Dp ⁶ для небольших размеров).Это иллюстрирует взаимодополняющий характер двух методов. Эталонные измерения DLS и PTA без нанесенных AuNP можно увидеть на рисунках S1 – S2 и в таблице S2. Никаких различий в размере комплексов не наблюдается, когда AuNP откладываются в BSA в PBS (150 мМ соль) или в BSA в 10 мМ NaPO ₄ без соли, что указывает на то, что BSA образует комплексы с AuNPs в обоих условиях. Образованные комплексы AuNP: BSA стабильны во времени: измерения DLS образца, инкубированного в течение 48 часов, такие же, как для образцов, инкубированных несколько часов (Рисунок S3).

Помимо гомоцистеина и альбумина, AuNP откладываются в сыворотке крови свиньи. Расчетная концентрация AuNP составляет 16,7 ± 2,5 и 19,2 ± 2,9 мкг / мл для 100% и 10% сыворотки соответственно. Сыворотка крови — это жидкость, оставшаяся после удаления из крови клеток и свернувшихся компонентов крови. Концентрация белка в сыворотке крови составляет примерно 70 мг / мл. Около половины белков в сыворотке крови — это альбумин. Есть также небольшие соединения со свободной тиоловой группой, такие как гомоцистеин и восстановленный глутатион.Таким образом, сыворотка крови представляет собой смесь двух сложных состояний: гомоцистеина и БСА. Однако в сыворотке содержится около 3700 различных видов белков, что создает гораздо более сложную ситуацию, чем BSA. AuNP помещают в неразбавленную сыворотку и сыворотку, разбавленную в десять раз PBS. Размер AuNP в сыворотке определяется с помощью PTA и DLS (рис. 5C, D и таблица 1). Спектры поглощения AuNP в разбавленной сыворотке перекрывают спектры, полученные в BSA, что позволяет предположить, что они одинакового размера.В неразбавленной сыворотке в спектрах поглощения можно наблюдать красный сдвиг в сторону более длинных волн, рис. 4. Этот сдвиг указывает на образование более крупных комплексов AuNP: белок [44]. Размер комплексов AuNP: белок определен как 75 ± 1 нм в 10% сыворотке с помощью PTA. Это похоже на отложения в BSA, что снова указывает на то, что комплексы одинакового размера образуются в разбавленной сыворотке и растворе BSA. В 100% сыворотке размер определяется как 113 ± 6 нм с помощью PTA, что позволяет предположить, что AuNP в 100% сыворотке образуют более крупные комплексы AuNP: белок, чем в 10% сыворотке и в буфере BSA.В 10% и 100% сыворотках доминирующие пики представляют размер DLS 142 ± 8 и 198 ± 12 нм, соответственно.

Размер комплексов AuNP: белок в 10% сыворотке аналогичен размеру, полученному методом DLS для комплексов AuNP: BSA, в то время как депонированные AuNP образуют более крупные комплексы в 100% сыворотке. Такое же соотношение обнаруживается с помощью PTA. Для сравнения, гидродинамические размеры PTA, определенные для AuNP в 100% и 10% сыворотке, лежат в том же диапазоне размеров, что и размеры, о которых сообщалось ранее. Для цитратных AuNP, смешанных с сывороткой человека, разведенных 1-1000000 в цитратном буфере, и диаметр гидродинамического режима по PTA составляет 68.5 нм. По данным DLS та же сывороточная смесь AuNP показывает гидродинамический диаметр в режиме пика при 70,1 нм [46], размер определяется в исследовании на основе взвешенного распределения интенсивности.

Осаждение агломератных AuNP

Процесс создания AuNP также позволяет осаждать агломерат AuNP (рис. 3B). Как описано выше, эти частицы представляют собой агломераты, образованные из очень мелких первичных частиц диаметром 5–6 нм. Чтобы сравнить, влияют ли различия в поверхностных структурах на поведение AuNP в растворах, мы депонировали агломерат AuNP размером 60 нм в BSA, легочную жидкость и сыворотку (рис. 6A и B).Массовая концентрация агломератов AuNP составляет приблизительно 2,0 ± 0,3 мкг / мл в растворе БСА и 3,0 ± 0,5 мкг / мл в растворе сыворотки и легочной жидкости. В отличие от сферического AuNP, розового поверхностного слоя после осаждения агломератов AuNP не наблюдалось. Это можно объяснить светорассеивающими свойствами агломератов AuNP, которые определяются не только размером агломерата, но и размером первичных частиц.

Рисунок 6. PTA-характеристика агломератов AuNP.

A) Измерения размера PTA AuNP: белковые комплексы в BSA и легочной жидкости.B) Измерение размера PTA AuNP: белковые комплексы в 10% и 100% свиной сыворотке.

https://doi.org/10.1371/journal.pone.0074702.g006

В BSA наблюдается широкий пик в диапазоне от 70 до 200 нм в распределении размеров, полученном с помощью PTA (рис. 6A). По сравнению со сферическими AuNP в BSA распределение значительно шире с меньшим количеством частиц ниже 70 нм. Аналогичный широкий пик наблюдался также после того, как агломерат AuNP был отложен в легочной жидкости.Можно было наблюдать общий сдвиг в сторону меньших гидродинамических размеров с более узким пиком (80–100 нм), рис. 6А.

AuNP, осажденные в 10% и 100% растворе сыворотки, демонстрируют различные размеры пиков в моде 81 ± 1 нм и 107 ± 2 нм, соответственно, определенные с помощью PTA. Это аналогично размерам, полученным для сферических AuNP. Осажденные агломераты AuNP менее склонны к образованию комплексов с BSA, чем в сыворотке и легочной жидкости. Это можно объяснить низким сродством между агломератом AuNP и BSA. В сыворотке и легочной жидкости содержится большое количество белков с разной степенью сродства к AuNP, что увеличивает вероятность эффективного образования комплекса AuNP: Protein.

Не обнаружено свидетельств распада агломератов AuNP (образовавшихся в газовой фазе) при осаждении в биологические жидкости. Просмотр изображений ПЭМ показывает значительные перемычки между первичными частицами, поэтому агломераты можно назвать твердыми агломератами. Этого можно ожидать, поскольку агломерация преимущественно происходит при повышенных температурах в генераторах аэрозолей.

Площадь поверхности AuNP по сравнению с площадью поверхности белка в растворе

Рассчитывали отношение площади поверхности белка к площади поверхности AuNP, агломератной и сферической, и сравнивали в физиологических растворах.Это было сделано для того, чтобы оценить, достаточно ли гомоцистеина и белка, чтобы полностью покрыть AuNP в растворе. Площадь поверхности, рассчитанная для физиологических растворов, представляла собой общую площадь поперечного сечения его составляющих. Это потому, что площадь поперечного сечения по отношению к площади поверхности AuNP, скорее всего, определяет количество белков или молекул гомоцистеина, которые могут связываться с поверхностью.

Площадь поперечного сечения молекулы гомоцистеина в этом исследовании аппроксимируется путем вычисления среднего ван-дер-ваальсова радиуса этой молекулы [47].Площадь поперечного сечения, основанная на приблизительном радиусе Ван-дер-Ваальса и без учета атомного перекрытия, тогда составляет 4,3 · 10 ⁻¹⁵ см ² на молекулу. Общее количество молекул гомоцистеина в растворе, 5 мМ, составляет 3,0 · 10 ¹⁸ / мл. Минимальное количество гомоцистеина для покрытия. Относительно общей площади осажденной поверхности AuNP, 10,3 ± 1,3 см ² / мл, минимальная числовая концентрация для покрытия частиц гомоцистеином в среднем составляет 2.4 · 10 ¹⁵ / # / мл (5,2 · 10 ⁴ см ² / мл). Разница в количественной концентрации, необходимой для полного покрытия осажденного AuNP с площадью поверхности гомоцистеина, по сравнению с площадью поверхности наночастиц в растворе, и фактическая концентрация составляет 3 порядка.

Общая площадь поперечного сечения белка в растворе BSA с концентрацией 35 мг / мл составляет 1,4 · 10 ⁵ см ² / мл. Это основано на площади поперечного сечения 4,6 · 10 ⁻¹⁷ м ² / белок [43].Для экспериментов со сферическим AuNP общая площадь осажденной поверхности составляла 0,7 ± 0,1 см ² / мл, для экспериментов с агломератом AuNP площадь осажденной поверхности составляла 0,9 ± 0,1 см ² / мл. Для агломератов AuNP для расчетов использовалась удельная поверхность 45 м ² / г [48].

Общая площадь поверхности белка в растворе свиной сыворотки обусловлена ​​большим количеством белков разного размера и структуры, которые невозможно вычислить.Для раствора легочной жидкости расчет не выполняется из-за сложности решения. Полезное приближение для сывороточных растворов может быть сделано на основе концентрации альбумина. В 10% сыворотке содержится 3,5 мг / мл альбумина, что соответствует приблизительно 1,4 · 10 ⁴ см ² / мл площади поверхности поперечного сечения белка. Для 100% сыворотки площадь поперечного сечения приблизительно равна концентрации площади поверхности раствора BSA, 1,4 · 10 ⁵ см ² / мл.

Это приближение, скорее всего, представляет собой минимальную общую площадь поперечного сечения растворов сыворотки.Это связано с тем, что концентрация белка в сыворотке вдвое выше, чем у альбумина, и большим разнообразием белков в сыворотке. Общая площадь осажденной сферической поверхности AuNP в 100% растворе сыворотки и 10% растворе сыворотки составляла 1,0 ± 0,1 см ² / мл и 1,2 ± 0,2 см ² / мл соответственно. Общая площадь поверхности осажденного агломерата составляла 1,4 ± 0,2 см ² / мл.

В заключение, имеется достаточная площадь поверхности гомоцистеина / белка, чтобы полностью покрыть все AuNP, депонированные в физиологических растворах.

Отложения в жидкости легких свиней

С физиологической точки зрения наиболее важным путем воздействия наночастиц является их осаждение в дыхательных путях. Таким образом, AuNP откладываются в легочной жидкости свиньи таким же образом, как и в других физиологических жидкостях. Легочную жидкость собирали промыванием легких свиньи PBS. Типичными составляющими легочной жидкости являются органические поверхностно-активные вещества и белки. Осажденная масса сферического AuNP соответствует концентрации 16.7 ± 2,5 мкг / мл. Найденный диаметр гидродинамической моды составляет 110 ± 7 и 265 ± 17 нм, определенный с помощью PTA и DLS соответственно (таблица 1 и рисунки 7A и B).

Для этого исследования не выполняется точное приближение общей площади поперечного сечения. Общая площадь осажденной сферической поверхности AuNP составляла 1,0 ± 0,2 см ² / мл. Общая площадь поверхности осажденного агломерата составляла 1,4 ± 0,2 см ² / мл.

Белки короны, связанные с частицами золота, отложенными в сыворотке крови свиньи

Обоснование осаждения AuNP в биологических жидкостях заключается в том, что белки и другие биомолекулы будут связываться и, таким образом, образовывать комплексы AuNP: белок в растворе.Чтобы визуализировать связывание белков в 100% и 10% сыворотке, комплексы AuNP: Protein отделяют от несвязанных белков центрифугированием. Полученные гранулы многократно промывают буфером; связанные белки десорбируются детергентом (SDS, додецилсульфат натрия) и разделяются по размеру с помощью SDS-PAGE (электрофореза в полиакриловом геле). Это способствует идентификации белков, имеющих высокое сродство к AuNP. Белки с низким сродством удаляются вместе с несвязанными белками в процессе промывки.Осадки не восстанавливаются в 100% сыворотке, и невозможно визуализировать связывание белка с помощью электрофореза. Однако в 10% сыворотке после центрифугирования выделяется прозрачный осадок. Существует отдельный набор белков, связанных с AuNP (рис. 8: дорожки 2, 5 и 6).

Рис. 8. Характеристики короны белка AuNP в 10% растворе сыворотки.

Дорожки 1 и 4: молекулярная масса (кДа) известных белков на 15% SDS-PAGE. Дорожка 2: сывороточные белки, связанные со сферическими AuNP.Дорожка 3: Белки сыворотки, обнаруженные в осадке без депонированного AuNP. Дорожка 5: Белки сыворотки, связанные со сферическими AuNP. Дорожка 6: Белки сыворотки, связанные с агломератами AuNP. Дорожка 7. Молекулярная масса (кДа) известных белков на 12% SDS-PAGE. Дорожки 8 и 9: белки на сферических AuNP, депонированные в раствор BSA и перенесенные / инкубированные в 10% свиной сыворотке перед центрифугированием и характеристикой коронного разряда (полоса 68 кДа в скобках).

https://doi.org/10.1371/journal.pone.0074702.g008

Интересно, что этот белковый паттерн отличается от белкового паттерна, обнаруженного на покрытых цитратом золотых частицах аналогичного размера в эмбриональной телячьей сыворотке [15], [49], предполагая, что депонированные AuNPs связывают разные белки. На SDS-PAGE альбумин мигрирует с молекулярной массой около 68 кДа, нет видимых или только едва видимых полос белка в этой области для дорожек 2, 5-6. Это указывает на то, что, конкурируя с другими белками сыворотки, альбумин не связывается с AuNP. Дорожки 5 и 6 на рисунке 8 сравнивают белки, связанные со сферическими и агломерированными AuNP.Никаких существенных различий между двумя типами структур в отношении связывания с белками не наблюдается.

Чтобы проверить стабильность комплексов AuNP: BSA в конкуренции с другими белками, комплексы переносят в 10% раствор сыворотки. Перенос осуществляется путем разделения комплексов центрифугированием, в результате чего образуется осадок. Супернатант удаляют и добавляют 10% раствор сыворотки, после чего осадок растворяют путем встряхивания раствора. После одного часа инкубации в 10% свиной сыворотке комплексы AuNP: белок центрифугируют и связанные белки разделяют с помощью SDS-PAGE (рис. 8: дорожки 8 и 9).Белковая картина аналогична тому, когда AuNP депонировали непосредственно в разбавленной сыворотке. Обратите внимание, что белки перемещаются на разные расстояния на страницах с разными концентрациями акриламида. Однако имеется дополнительная полоса белка с молекулярной массой около 68 кДа (рис. 8, дорожка 8–9), которая, скорее всего, соответствует альбумину, что позволяет предположить, что некоторое количество альбумина остается на AuNP после одного часа инкубации в сыворотке свиньи.

Сравнение размера комплексов AuNP: Protein в различных растворах показывает увеличение размера при увеличении сложности белков (Таблица 1).Наименьшие AuNP: белковые комплексы обнаружены в буферном растворе BSA, большие или аналогичные размеры обнаружены в 10% сыворотке, а самые большие размеры — в 100% сыворотке и легочной жидкости. Более крупные структуры в 100% сыворотке и легочной жидкости можно объяснить большим разнообразием белков и более высокой концентрацией более крупных белков. Более крупные белки привели бы к более толстой короне. Различия в комплексах AuNP: белок в 10% и 100% сыворотке также проявляются в экспериментах по центрифугированию. В 10% сыворотке комплексы AuNP: белок легко центрифугируются, но не в 100% сыворотке, что указывает на комплексы с меньшей плотностью.Сообщалось, что многие наночастицы, включая AuNP, связывают липопротеины в сыворотке или плазме крови [50]. Липопротеины — это комплексы аполипопротеинов с фосфолипидами, триглицеридами и холестерином. Они имеют низкую плотность, 0,95–1,06 мг / мл, и диаметр около 10–1000 нм. Таким образом, связывание липопротеинов может объяснить, почему размер AuNP больше на 100%, и почему их труднее осаждать.

Резюме

В заключение, когда частицы в воздухе переходят в физиологический раствор, их морфологические характеристики и характеристики раствора играют ключевую роль в последующем образовании комплекса частица: белок.Знание характеристик этих комплексов будет жизненно важно для полного понимания токсичности частиц и их биологической судьбы.

AuNP: Белковые комплексы разных размеров образуются и характеризуются множеством методов. При осаждении в белковых растворах, таких как BSA, легочная жидкость и сыворотка AuNP: образуются белковые комплексы. Состав короны также отличается от состава AuNPs, образующихся в жидкой суспензии. При осаждении в растворе без белков, только с одной биомолекулой, такой как гомоцистеин, агрегаты более крупных микронных размеров образуются в виде хлопьев.Было также показано, что морфологические свойства осажденных частиц изменяют их характеристики в растворе.

Комбинация методологий в этом исследовании представляет собой важный шаг вперед в исследовании границы раздела воздух-жидкость. Можно генерировать переносимые по воздуху частицы с известными и переменными характеристиками и помещать их в физиологические растворы все большей сложности. В этих растворах генерируемые частицы образуют комплексы с окружающими белками и биомолекулами и образуют новые биологические объекты.Эти комплексы можно охарактеризовать с помощью дополнительного массива измерений DLS, PTA и УФ-видимой спектроскопии, чтобы определить их состояние и стабильность в растворе, и сравнить с состоянием в воздухе, характеризующимся подвижностью, массой и морфологией.

Естественным следующим шагом было бы использовать этот полный метод в специально разработанной камере раздела воздух-жидкость [29], моделирующей условия в легких. В такой камере можно подвергать клетки воздействию частиц, находящихся в воздухе, и осаждать известную фракцию на клетки.Камера доводит аэрозоль до физиологических условий во время процесса осаждения. С помощью этого процесса можно было бы изучить изменение характеристик наночастиц, когда они переходят в естественный физиологический раствор, продуцируемый эпителиальными клетками, изучая при этом неблагоприятное воздействие на клетки.

Материалы и методы

Получение и характеристика наночастиц золота в газовой фазе

Аэрозоль AuNP был получен с помощью высокотемпературного испарения и конденсации [31].Затем последовала печь для спекания для получения сферических частиц. Биполярное зарядное устройство с последующим анализатором дифференциальной подвижности использовали для отбора частиц размером 60 нм. Распределение по размерам произведенных частиц было также определено с прямым доступом к памяти, подключенным к электрометру, образующему сканирующий измеритель подвижности частиц (SMPS). Для осаждения находящиеся в воздухе AuNP направляли в электростатический осадитель (ESP). Полный план системы можно увидеть на рисунке S4 и подробно описан в других статьях [48], [51].При образовании аэрозольных частиц температура испарительно-конденсационной печи поддерживалась на уровне 1800 ° C. Температура печи для спекания, в которой агломераты частиц спекались в сферы, поддерживалась на уровне 600 ° C. Для создания аэрозоля из агломерата AuNP с диаметром моды пика 60 нм необходимо было немного снизить температуру генерации. Чтобы получить сферические частицы размером 60 нм, аэрозоль спекали и затем пропускали через DMA для отбора частиц размером 60 нм.Для агломератов 60 нм печь для спекания была неактивна, в то время как DMA был установлен, как и для сфер, для отбора частиц 60 нм. Неопределенность выбранного размера частиц прямым доступом к памяти составляет менее 10%. Однако повторяемость значительно выше.

Принцип работы DMA.

Прямой доступ к памяти состоит из двух концентрических цилиндров, где частицы вводятся около внешнего цилиндра и транспортируются через прямой доступ к памяти посредством потока оболочки [32]. Если не приложить дополнительную силу, частицы, введенные во внешний цилиндр, не будут выбраны.Однако при приложении напряжения между двумя цилиндрами часть заряженных частиц будет направлена ​​к внутреннему цилиндру. Частицы с определенной электрической подвижностью будут отбираться в выходной щели, показанной на рисунке S5. Таким образом, после прямого доступа к памяти создается распределение монодисперсных частиц. Скорость потока газа-носителя через систему составляла 1,7 л / мин, а скорость потока оболочки прямого доступа к памяти составляла 10 л / мин. Прямой доступ к памяти в системе был Венского [52] типа с длиной 11 см, внутренним радиусом 25 мм и внешним радиусом 33 мм.Электрическая подвижность, Z , частиц описана в прямом доступе к памяти как:

Конечная скорость, V _TE , в электрическом поле E связана с количеством элементарных зарядов, n , умноженным на e , деленным на вязкость, η , и эквивалентную подвижность диаметр частиц d . Передаточная функция DMA (расширение из-за прибора) частиц 60 нм проиллюстрирована здесь на Рисунке 1 и на Рисунках S5A, B и C.Перед входом в прямой доступ к памяти частицы заряжаются с помощью биполярного зарядного устройства, создавая распределение заряда частиц, подобное Больцману [53]. Следовательно, часть частиц будет заряжена дважды. Двухзарядные частицы, выбранные при одном и том же напряжении прямого доступа к памяти, имеют такую ​​же электрическую подвижность, что и однозарядные частицы, но большего размера. Как следствие, небольшая часть выбранных частиц будет иметь больший диаметр подвижности. В этом исследовании он составлял 85,5 нм (Таблица S1). Для сгенерированного распределения частиц по размерам и при настройках прямого доступа к памяти, используемых в этом эксперименте, только 3–6% выбранных частиц имеют двойной заряд, и, таким образом, для практических целей почти ничтожны.

В сочетании с электрометром и биполярным зарядным устройством DMA образует то, что называется сканирующим спектрометром подвижных частиц (SMPS). Данные о подвижности и числовой концентрации частиц объединяются при инверсии данных, создавая числовое распределение с временным разрешением.

Принцип APM.

APM состоит из двух вращающихся цилиндров. Уравновешивая центробежную силу с электростатической силой, только одна масса частицы может проходить через объем за один раз между вращающимися цилиндрами [33].Отношение между диаметром подвижности и массой частицы (агрегата) может быть определено путем объединения прямого доступа к памяти с APM [48], [54].

Определение характеристик ТЕМ.

Для дальнейшей характеристики образующихся частиц агломерат и спеченные (сферические) частицы были нанесены на сетку для просвечивающей электронной микроскопии (ТЕМ) Cu с кружевным углеродным покрытием. Автоэмиссионный ТЕМ 300 кВ (JEOL 3000 F), оборудованный рентгеновским энергодисперсионным спектрометром (XEDS), использовался для анализа морфологии и кристаллической структуры созданных AuNP и подтверждения их химического состава.

Депонирование

ЭЦН состоит из металлической пластины, на которую во время осаждения подается напряжение 6 кВ [38]. На металлическую пластину электрода помещают стеклянный стакан диаметром 5 см, содержащий известное количество физиологической жидкости. Поскольку используемый DMA работает с положительным напряжением (отбирая отрицательно заряженные частицы), только отрицательно заряженные частицы поступают в ESP. Когда на металлическую пластину подается положительное напряжение ESP, частицы, таким образом, выталкиваются вниз и осаждаются в биологической жидкости.

Используя среднюю общую числовую концентрацию во время каждого из событий осаждения, можно рассчитать общее количество осажденных AuNP. Для приложенного напряжения ESP ожидается 100% эффективность осаждения. Затем общее рассчитанное количество AuNP делили на общий собранный объем физиологического раствора, после чего можно было рассчитать концентрации масса / количество / площадь поверхности. AuNP помещали в 5 буферных растворов физиологических жидкостей: чистый буферный раствор PBS, 5 мМ гомоцистеина (Sigma) в PBS, 45 мг / мл BSA (Sigma) в PBS, 100/10% сыворотку крови свиньи, разбавленную PBS, и свиную. легочная жидкость.

Жидкость из легких свиньи была извлечена путем многократного промывания легких свиней PBS. Легкие массировали во время процедуры полоскания, чтобы обеспечить попадание PBS в нижние части легких. Перед использованием раствор центрифугируется для удаления компонентов крови и других примесей. Животные участвовали в другом исследовании острых заболеваний в Лундском университете, и во время процедуры им вводили седативное средство и искусственную вентиляцию легких. Поскольку они были частью другого исследования, имевшего острый эффект, не требовалось специального этического разрешения для извлечения легочной жидкости и сыворотки крови в соответствии с европейским и шведским законодательством.

Характеристика в решении

В растворе частицы анализировали с использованием динамического светорассеяния (Malvern Nano S, оснащенный красным гелий-неоновым лазером с длиной волны 632,8 нм). Рассеянный свет регистрировался при 175 °. Раствор гомоцистеина с AuNP готовили в виде серии разведений с концентрациями AuNP 100, 10, 1 и 0,1%. Разбавленный раствор представлял собой гомоцистеиновый буфер. Раствор BSA также был приготовлен в виде серии разведений; разбавленный раствор представлял собой раствор BSA в буфере PBS. Были приготовлены серии разведений для концентраций AuNP 100, 10 и 1%.100% сыворотка, 10% сыворотка и легочная жидкость были измерены без подготовки этапов разведения. Для всех физиологических жидкостей, с AuNP или без них, результат анализа распределения использовался для определения размера в растворе. Под анализом распределения понимается многократная экспоненциальная аппроксимация корреляционной функции, позволяющая рассчитывать различные режимы размера. Для гомоцистеина анализ распределения был невозможен, поэтому было определено Z-среднее значение. Произведена попытка преобразования числа. Поскольку альбумин и другие белки / биомолекулы являются доминирующими по количеству, оказалось трудно различить какие-либо другие пики, кроме пика альбумина.Однако тенденция к пику числового размера может наблюдаться около 40–100 нм в сыворотке и BSA. Гидродинамический диаметр, определяемый и упоминаемый DLS, представляет собой диаметр пика или так называемого модового диаметра для взвешенного по интенсивности распределения размеров.

Образцы

также были измерены с использованием PTA (модель NanoSight LM10 HS), оснащенного лазером с длиной волны 405 нм. Все образцы разбавляли milliQ H ₂ O до концентрации, подходящей для измерения. Используемые разведения составляли: 100000 × для образцов 100% сыворотки, 10000 × для образцов 10% сыворотки, 100 × для образцов BSA и 100 × для легочной жидкости.Параметры обработки: размытие = 9 × 9, минимальный ожидаемый размер частиц = 100 нм и минимальный трек = авто. Гидродинамический диаметр, определяемый и относящийся к PTA, является пиком или так называемым модовым диаметром для числового распределения размеров, полученного путем подгонки логнормальной функции к определенным распределениям размеров. Для каждой записи DLS и PTA диаметр моды для комплекса AuNP: Protein был идентифицирован и усреднен со стандартным отклонением (таблица 1). Кроме того, распределения были усреднены в единую цифру (Рисунок 4).Общее количество записей для каждого решения было 10 для DLS. Для PTA количество записей составляло 5 для легочной жидкости, BSA и 10% сыворотки и 3 для 100% сыворотки.

измерения УФ-поглощения были выполнены с использованием спектрометра Kanomax. Все измерения проводились в кювете Quartz. Фоновые сигналы были получены от тех же биологических жидкостей, в которых производились осаждения, и вычитались.

Корона белка частиц была проанализирована на AuNP в физиологических жидкостях с помощью SDS-PAGE.Образцы объемом 1 мл центрифугировали 15 минут при 13000 об / мин, после чего супернатант удаляли и добавляли 0,5 мл PBS. Осадок диспергировали и перемещали в новые пробирки, чтобы свести к минимуму неспецифическое связывание белка со стенками пробирки. Эта процедура повторялась дважды. После последнего центрифугирования супернатант удаляли и к образцам добавляли 10 мкл загрузочного буфера SDS-PAGE для растворения белков, связанных с частицами. Белки разделяли с помощью SDS-PAGE и визуализировали кумасси синим.

Контрольные измерения

PTA-анализ проводился в 100 000 и 10 000 разведениях водой milliQ для 100% сывороточного и 10% сывороточного раствора AuNP, соответственно. Это означает, что концентрация белка после разведения одинакова в 10% и 100% сыворотке, но что концентрация AuNP в десять раз ниже в 100% сыворотке.

Контрольные измерения 100% и 10% разведений сыворотки без AuNP, как и ожидалось, практически идентичны, поскольку концентрация белка одинакова.Однако растворы с нанесенными AuNP отличаются от соответствующих эталонных измерений. При ПТА в 10% -ном растворе AuNP сыворотки больше частиц на мл, чем в 100% -ном растворе AuNP сыворотки. Референсные растворы 100% и 10% сыворотки имеют одинаковую концентрацию белка из-за разведения перед измерениями PTA и одинаковый размер при измерении PTA. Соотношение между количеством депонированных AuNP в 10% сыворотке и 100% растворе сыворотки должно быть 10: 1. Как видно на рисунке S6, это не относится к двум растворам с AuNP.В заключение, невозможно вычесть фоновые частицы из измерения PTA с частицами, используя эталонное измерение без частиц. Скорее всего, это связано с разными рассеивающими свойствами между биомолекулами и AuNP.

Заявление об этике

Свиньи легкие и плазма крови были получены в ходе другого исследования, проводившегося в Лундском университете, Государственный комитет по этике Швеции (номер разрешения: 172-11). В исследовании изучали острые сердечные эффекты у свиней, подвергшихся седации и вентиляции.Легочная жидкость и сыворотка были получены из легких и крови умерших свиней. Оба исследования следуют шведскому и европейскому законодательству в отношении этического одобрения, Директиве Совета Европейских сообществ EG 2010/63 / EU, Закону Швеции о защите животных 1988–534, Постановлению Швеции о защите животных 1988–539, Положению Швеции, касающемуся использование животных в научных целях SJVFS 2012∶26 L150.

2022 GMC Sierra 1500 AT4 4WD Crew Cab 147 «Характеристики и характеристики

Сиденья, передний ковш с центральной консолью

Регулятор сиденья, водительский 10-позиционный переключатель, включая поясничный

Регулятор сиденья пассажира с 10-позиционным электроприводом, включая поясницу

Сиденья с подогревом водителя и переднего подвесного пассажира

Память водителя вызывает «предварительные настройки» водителя для водительского сиденья с электроприводом и наружных зеркал.

Сиденья вентилируемые водителя и переднего пассажира

Сиденье, приподнятое заднее сиденье с пакетом для хранения, складывающаяся скамья 60/40 для моделей Crew Cab, включает полноразмерное многоместное сиденье, место для хранения на спинке сиденья с левой и правой стороны, центральный откидной подлокотник с 2 подстаканниками, место для хранения под сиденьем на всю ширину кабины , (включая фиксатор верхнего страховочного ремня детского сиденья)

Центральная консоль, напольная, с подстаканниками, хранилище для сотового телефона, управление шнуром питания, возможность подвешивания папки с файлами

Напольное покрытие, цветное ковровое покрытие

Premium Floor Liners со съемной ковровой вставкой, спереди

Premium Floor Liners со съемной ковровой вставкой сзади

Рулевая колонка с ручным регулированием наклона и выдвижением

Рулевое колесо, обтянутое кожей

Руль с подогревом

Комбинация приборов, комбинация из 6 приборов со спидометром, уровнем топлива, температурой двигателя, тахометром, напряжением и давлением масла

Информационный центр для водителей, 4.Цветной дисплей с диагональю 2 дюйма с возможностью персонализации водителя

Приложение Trailering в автомобиле, система включает в себя контрольный список, напоминания о техническом обслуживании прицепа, предупреждения о безопасности прицепа, пробег прицепа, напоминание о буксировке / перемещении и электрическую диагностику прицепа

Компас, расположенный в комбинации приборов

Дисплей внешней температуры, расположенный на дисплее радио

Индикатор износа тормозных накладок

Окна, передняя панель с электроприводом, вывод драйверов вверх / вниз

Стеклоподъемник, передний электропривод, пассажирский экспресс вверх / вниз

Окна, задний привод, экспресс вниз

Замки дверные, силовые

Бесключевое открытие и запуск

Система дистанционного пуска автомобиля

Круиз-контроль на рулевом колесе

Система защиты от кражи, несанкционированный доступ

USB-порты, 2 (первый ряд) расположены на панели приборов

USB-порты (внутри консоли с ковшеобразными сиденьями), 2 также включают 1 устройство чтения карт SD и вспомогательный разъем

Розетка на приборной панели, 120 В (400 Вт совместно с розеткой, устанавливаемой на кровати (KC9))

Розетка, передняя вспомогательная, 12 В

USB-порты, двойные, только для зарядки (2-й ряд)

Сетевая розетка, задняя вспомогательная, 12 В

Розетка на кровати, 120 В (400 Вт совместно с розеткой (KI4), установленной на приборной панели)

Кондиционер, двухзонный автоматический климат-контроль

Вентиляционные отверстия, задние

Обогреватель заднего стекла с электроприводом

Зеркало заднего вида с автоматическим затемнением

Вспомогательные ручки на передней передней стойке для водителя и пассажира, на задней средней стойке

Поддержка GMC Connected Access (В соответствии с условиями.